APRPG肽和聚（2-乙基-2-噁唑啉）构建的多功能脂质体的研究

针对普通pH-敏感脂质体稳定性和靶向性差的问题，采用APRPG肽和聚（2-乙基-2-噁唑啉）（PEOZ）构建多功能脂质体。PEOZ的亲水性和酸敏性赋予脂质体长循环性和pH-敏感性，APRPG的肿瘤新生血管亲和性赋予脂质体主动靶向性。PEOZ化脂质体通过EPR效应聚集于肿瘤组织，APRPG介导其进入新生血管内皮细胞，核内体低pH诱导具有酸敏性的脂质体释放药物。本项目通过在不同介质中孵育、动物实验、红细胞膜融合等实验验证脂质体的长循环性和pH-敏感性，通过肿瘤新生血管内皮细胞模型结合、摄取实验及荷瘤小鼠的药效学实验等验证脂质体的靶向性。此外，针对PEG化脂质体产生的加速血液清除（ABC）现象，考察大鼠重复注射PEOZ化脂质体后药动学参数的变化。通过本研究，确定主动靶向长循环pH-敏感脂质体的处方，探索构建多功能脂质体的可行性，为实现抗癌药物的细胞内递送提供科学依据，并为解决ABC现象提供参考。

本项目采用APRPG肽和聚（2-乙基-2-噁唑啉）（poly(2-ethyl-2-oxazoline), PEOZ）构建多功能脂质体。首先，合成不同分子量的PEOZ，并将PEOZ与胆固醇半琥珀酸酯、胆固醇氯甲酸酯等脂质衍生物偶联。利用PEOZ脂质修饰脂质体，通过不同pH缓冲溶液药物释放、不同pH条件下肿瘤细胞毒、钙离子稳定性、大鼠体内药代动力学等实验，最终得到稳定性和pH敏感性均最佳的分子量为PEOZ2000。进一步考察了PEOZ 2000修饰脂质体的相关性质，发现PEOZ 2000不仅可以增加脂质体的稳定性，延长其大鼠体内循环时间，并且能够赋予脂质体良好的pH敏感性，能够解决普通pH敏感脂质体（pH-sensitive liposome，PSL）稳定性差，或经PEG脂质修饰后PSL酸敏感性丧失的问题。令人惊喜的是，细胞摄取后，PEOZ能够帮助脂质体成功发生“核内体逃逸”，直接释放药物进入细胞浆或细胞核。. 针对PEG化脂质体产生的加速血液清除（accelerated blood clearance，ABC）现象，考察了磷脂类型和动物模型对ABC现象的影响，发现大鼠重复注射饱和或不饱和磷脂制备的PEG化脂质体均能产生ABC现象，不同的动物模型注射卵磷脂制备的PEG化脂质体均能产生ABC现象，因此ABC现象可能是广泛存在于生物体内的一种免疫反应。考察大鼠重复注射PEOZ修饰脂质体后药动学变化，与PEG脂质体相比，重复注射PEOZ修饰脂质体仅产生轻微的ABC现象。. 将APRPG与PEOZ-脂质偶联，构建主动靶向脂质体。与普通脂质体和PEOZ修饰脂质体相比，特异性表达血管内皮生长因子的A431细胞对APRPG修饰脂质体的摄取显著增强。小鼠抑瘤实验证明APRPG脂质体能主动靶向于肿瘤组织，并具有较好的抗肿瘤效果。. 本项目按照预期计划进行，确定了主动靶向长循环pH-敏感脂质体的处方及制备工艺，探索了构建多功能脂质体的可行性，为实现抗癌药物的细胞内递送提供科学依据，并为解决ABC现象提供参考。. 依托本项目，现已公开发表SCI论文3篇，国家核心期刊论文5篇，本项目的独创性成果已申请药剂学发明专利1项，培养硕士研究生5名，形成了一个稳定的、以青年为主的科研团队。