疏肝饮改善慢性避水应激模型大鼠肠道屏障功能的机理研究

Irritable bowel syndrome is a chronic functional bowel disorder as the main clinical manifestations of abdominal pain and discomfort or changes in bowel habits and stool. IBS seriously affects the patient's life and work. Because the pathogensis of IBS is unclear, there is a lack of effective treatment. We want to obseve the numbers and activation of mast cell、lleum permeability and tight junction in the model of water-avoidence stress induced Diarrhea-IBS rat. The purpose of this study is to find out the potential contaction between mast cell and intestinal permeability, tight junction andintestinal barrier function; To study whether Shugan yin decoction have the treatment to improve intestinal barrier function; To explore th probability treatment mechanism of Shuganyin decoction.

肠易激综合征（Irritable bowel syndrome, IBS）是一种以腹痛或腹部不适伴有排便习惯和大便性状改变为主要临床表现的慢性功能性肠病。严重影响患者的生活质量。由于IBS的发病机制尚不明确，故还缺乏有效的药物治疗。本课题对避水应激诱导的腹泻型IBS模型大鼠回肠黏膜肥大细胞的数量及活化情况、回肠通透性及回肠黏膜紧密连接相关蛋白进行了观察，旨在明确肥大细胞与肠道通透性、以及紧密连接相关蛋白与肠道屏障功能之间的内在联系。研究疏肝饮是否具有改善肠道屏障功能的作用，探讨其改善临床症状，发挥疗效的可能机制。

本课题对避水应激诱导的腹泻型IBS模型大鼠回肠黏膜肥大细胞的数量及活化情况、回肠通透性及回肠黏膜紧密连接相关蛋白进行了观察，旨在明确肥大细胞与肠道通透性、以及紧密连接相关蛋白与肠道屏障功能之间的内在联系，明确疏肝饮是否具有改善肠道屏障功能的作用。造模后各组大鼠均出现大便次数增多，粪质稀薄，经HE染色后观察到各组大鼠回肠粘膜完整，未见粘膜破损及炎性细胞浸润。各组大鼠回肠肥大细胞检测结果显示，与正常组相比较各组大鼠回肠粘膜MC数目明显增多，面积增大、周长增加、圆度变小、等效直径增大，以模型组增多尤为明显，而疏肝饮组及西药组有所下降，但尚未接近正常组水平；通过对紧密连接蛋白ZO-1，occludin进行免疫荧光标记观察发现，正常肠粘膜上皮细胞外围的紧密连接蛋白呈现出连续而紧密的环状结构，而模型组的紧密结构几乎完全被破坏，不规则的分散在细胞外围，荧光染色暗淡。与模型组相比较，疏肝饮组及西药组的紧密连接结构仅被局部破坏，损伤程度明显减轻。运用医学图像定量分析软件进行荧光阳性灶平均光密度的分析比较可见，模型组的平均光密度较正常组明显减低，经疏肝饮及得舒特治疗后，平均光密度均有所上升，差异无统计学意义。各组大鼠肠道紧密连接相关蛋白的Westen-Blot检测结果显示与正常组相比各组大鼠结肠粘膜三种紧密连接蛋白的含量明显下降，而经疏肝饮及得舒特治疗以后，紧密连接蛋白的含量明显增加，但亦未能接近正常组水平。肠道通透性实验，运用FD-4作为标记物，在体实验显示，模型组大鼠结肠对FD-4的通透性较正常组有显著增加，在30min内增加为正常组的3倍。经疏肝饮和得舒特组能不同程度的抑制大鼠肠道通透性的升高。离体实验将分离出的回肠黏膜固定于Ussing型灌流槽中，通过测定FD-4的Papp反映肠黏膜通透性的变化。120 min内模型组FD-4的Papp为（4.695± 0.3629）×10-7 cm/s，其Papp增加为正常组的2.6倍，疏肝饮和得舒特能有效降低肠黏膜对FD-4的Papp。本研究的结果提示，腹泻型IBS确存在肠道屏障功能障碍，而疏肝饮能通过减轻肠道紧密连接相关蛋白和细胞骨架的破坏，抑制肠道通透性的增加，从而起到保护肠道屏障功能的作用。