血浆miRNA表达谱作为非小细胞肺癌厄洛替尼获得性耐药的功能型分子标志物及其调控机制研究

The mechanism of Non-small cell lung cancer(NSCLC) EGFR-TKI acquired resistance and the clinical response strategy against it have become a research hotspot in the field of molecular targeted therapy. Many research inspired us that genetic abnormalities of encoding genes might play a weak role in the EGFR-TKI resistance while epigenetic alternation, such as miRNA regulation, might be widely involved. We have found a group of plasma miRNAs (miR-21, miR-210, miR-125b, miR-27a, miR-200c; miR-22, miR-497, miR-203 ) are closely related with erlotinib acquired drug resistance in non small cell lung cancer patients and we intend to expand clinical samples to verify it; meanwhile, we will study the mechanism of the differential expression level of above miRNAs by transcription factors with some co-regulatory role such as c-Fos, TCF12, STAT3, EGR1 or methylation in miRNA promoters using drug resistant cell line then combining with in vivo experiment model finally elucidate the regulation mechanism of the functional plasma miRNA biomarker which is not only predictive for erlotinib acquired resistance but also modulating it. Our research will provide more information for monitoring and early detection of EGFR-TKI acquired drug resistance in NSCLC patients.

非小细胞肺癌（NSCLC）EGFR-TKI获得性耐药的机制及临床应对策略已是目前靶向治疗领域急待解决的问题。课题组认为编码基因遗传学水平异常在EGFR-TKI耐药中的影响权重较低，而miRNA作为表观遗传学调控的重要机制则与之密切相关。课题组已初步发现一组血浆miRNA差异表达谱（miR-21、miR-210、miR-125b、miR-27a、miR-200c；miR-22、 miR-497、miR-203）与NSCLC厄洛替尼获得性耐药密切相关，我们拟进一步扩大临床样本检测明确耐药相关血浆miRNA标志物，同时从对上述miRNA具有一定共同调控作用的转录因子（c-Fos、TCF12、STAT3、EGR1）和启动子甲基化两个角度，运用耐药细胞和体内实验，研究其差异表达的上游调控机制和体内外调控耐药的功能和相关信号通路，为EGFR-TKI获得性耐药的动态监测、早期评判和机制完善提供重要信息。

microRNA(miRNA)作为新近发现的转录后调控的重要分子，广泛参与了各种生命活动过程。同时，miRNA在肿瘤发生、发展、预后、治疗以及耐药等过程中也起着非常重要的作用。.目前临床上缺少可靠的非侵入性早期诊断标记物，以促进非小细胞肺癌的早期干预和治疗。对肺癌进行精确的亚组分型能够使得患者获得最大的治疗益处并避免潜在的治疗副反应。而既往报道的研究对象不同、缺乏统一一致的方法学流程，可能导致过去所发现的非小细胞肺癌相关的循环miRNA的结果存在较大的差异性。课题组通过芯片及进一步多阶段大样本验证的方法，分别对非小细胞肺癌中占比最大的肺腺癌及肺鳞癌患者的血清、血浆样本分别进行系统性的探索。在肺腺癌血浆、血清和肺鳞癌血浆、血清样本中，分别发现了6个、4个、4个以及3个miRNA可作为潜在的诊断标志物。亚组分析显示，血浆miR-19b-3p及miR-425-5p具有潜在的指示EGFR突变的作用。课题组还在胃癌患者血浆、血清中发现了5个及6个潜在的用于诊断胃癌的循环miRNA。.临床上使用的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI），几乎大多数患者最终都会对EGFR-TKI产生耐药，使得病情进展。课题组发现TGF-β1、miR-21可以下调PTEN基因的表达，激活AKT和ERK通路，从而导致非小细胞肺癌对EGFR-TKI的耐药；而氟维司群可上调let-7c的表达，增强EGFR-TKI的敏感性。同时，课题组还发现miRNA介导的FOXO3a/VEGF/CCL2信号，在肺癌正常成纤维细胞（NFs）转化成肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）过程中发挥了十分重要的作用，这为肺癌的诊断和治疗靶点提供了新思路。.目前临床工作中，缺少具有较高敏感性及特异性，方便易于获取的用以指示肿瘤患者预后信息的指标。课题组通过分析公用数据库，并利用Taqman芯片检测、分析，发现了非小细胞肺癌中miRNA及相关基因miRNA结合位点的SNP可作为非小细胞肺癌患者预后的标志物，如：rs895819等。.总之，课题组这些研究将为揭示肿瘤多方面的机制打下基础，并为将来进一步可能服务于临床上提供依据。