hTERT启动子调控下CD137L在肺癌A549细胞中的表达及其抑制肿瘤免疫的实验研究

目前研究表明共刺激分子受体和配体结合后不仅可以通过受体传递正向信号还能通过配体传递逆向信号。CD137L(CD137配体)是重要的共刺激分子，为Ⅱ型跨膜糖蛋白。我们研究发现CD137配体（CD137L）表达在非小细胞肺癌（NSCLC）及肺癌细胞株A549表面，与其受体CD137结合后可介导逆向信号上调免疫负性调控分子PD-L1在肺癌细胞株上的表达，并增强其抑制CD8+T细胞增殖的能力。.端粒酶是一种核糖核蛋白复合物，在绝大多数恶性肿瘤细胞中呈阳性表达，人端粒酶逆转录酶(hTERT)是端粒酶的限速酶，hTERT启动子可用于肿瘤特异性基因表达，其活性在肿瘤的发生、发展过程中起着重要作用，并且在癌症的基因治疗中已经成为一个新的治疗靶点。本研究在原有工作的基础上通过构建hTERT启动子调控下CD137L表达载体，从分子、细胞、荷瘤动物模型研究CD137／CD137L能否作为肿瘤免疫基因治疗靶点。

CD137L（CD137 Ligand，CD137配体）分子又名4-1BBL是肿瘤坏死因子超家族中的重要成员。研究发现CD137L表达在多种肿瘤组织及细胞株的表面，并且与其受体CD137结合后能够介导逆向信号。CD137L分子及其介导的逆向信号与多种血液系统肿瘤的发生和发展相关。我们前期研究发现（81071643）CD137L表达与非小细胞肺癌（NSCLC）临床分期及肿瘤分化程度相关，并且 CD137L 表达阳性患者的生存期较表达阴性患者延长。CD137L介导的逆向信号能够抑制NSCLC细胞增殖，导致细胞凋亡及细胞周期的阻滞。此外，端粒酶是一种核糖核蛋白复合物，在绝大多数恶性肿瘤细胞中呈阳性表达，人端粒酶逆转录酶(hTERT)是端粒酶的限速酶，hTERT启动子可用于肿瘤特异性基因表达，其活性在肿瘤的发生、发展过程中起着重要作用，并且在癌症的基因治疗中已经成为一个新的治疗靶点。因此，我们本研究构建了hTERT启动子调控下CD137L表达载体，探讨了CD137／CD137L在NSCLC细胞治疗中的作用。本研究成功构建了hTERT启动子调控下CD137L表达载体，RT-PCR及流式细胞术均表明转染hTERT-CD137L质粒后，仅A549细胞可表达CD137L，而正常肺上皮细胞株HPAEpiC不能表达CD137L，而转染CMV-CD137L后，A549及HPAEpiC均可表达CD137L，表明hTERT启动具有肿瘤细胞靶向性。进一步发现，高表达CD137L的A549细胞更易于被CIK细胞杀灭。体内实验研究结果显示注射CIK细胞后，CD137L过表达组的小鼠肿瘤大小较对照组减小明显。本研究揭示了hTERT启动子调控下CD137L在NSCLC细胞免疫治疗中的作用，为NSCLC的免疫靶向治疗提供新的依据。