核受体RXRα调控自噬相关p62/TRAF6炎症信号通路参与易损斑块形成的分子机制研究

Inflammation plays a pivotal role in atherosclerotic plaque formation and rupture, It has been considered that anti-inflammation through autophagy would be the most promising target for drug therapy. According to previous experiments, we found there was a significant high expression of nuclear receptor RXRα with down-regulation of autophagy and up-regulation of inflammatory response in atherosclerotic plaque. Ligand of RXRα promotes autophagy and suppresses inflammation. Our hypothesis is that, RXRαactivates autophagy-related inflammatory pathway and vulnerable plaque formation through the inhibition of autophagy. Atherosclerotic inflammation could be inhibited by blocking RXRαtranslocation or its interaction with other proteins , which also contribute to improved plaque stability. On the basis of previous works, we plan to investigate the relationship between RXRα non-genomic effect and atherosclerotic inflammation, clarify the mechanism of RXRαregulation of autophagy-related p62/TRAF6.inflammatory pathway, and explore the possibility of RXRα as an new molecular target of improving plaque stability. We expect to find new mechanism, new target and new train of thought in atherosclerotic inflammation and drug target for improving plaque stability.

炎症反应异常激活是易损斑块形成和破裂的关键。最新研究认为，调控自噬相关炎症信号通路可能为改善斑块稳定性治疗提供新的干预靶点。我们前期研究发现，晚期斑块炎症细胞中核受体RXRα表达上调伴随自噬水平下降和炎症激活，而RXRα的特异性配体能够促进离体炎症细胞自噬和减轻炎症反应。据此我们推测：RXRα通过抑制自噬激活自噬相关炎症信号通路，参与易损斑块形成和破裂，拮抗RXRα对自噬的调控作用可能抑制炎症并稳定斑块。本项目拟在前期工作的基础上，以RXRα蛋白表达、定位与巨噬细胞自噬调控的关系为主线，深入研究RXRα调控自噬相关p62/TRAF6炎症信号通路，参与易损斑块形成的分子机制，探讨RXRα作为调控斑块稳定性药物分子靶点的可能性，以期发现新的动脉粥样硬化炎症反应机制和干预靶点，为寻找和开发改善斑块稳定性的药物提供新思路和新手段。

研究背景：炎症反应异常激活是易损斑块形成和破裂的关键，核受体RXRa长期以来被认为是非常有吸引力的抗动脉粥样硬化药物靶点。本项目研究了一种RXR的小分子配体K-80003的抗动脉粥样硬化作用及其分子机制，K-80003是非甾体消炎药舒林酸的类似物。.方法：利用我们之前建立的ApoE-/-小鼠颈动脉动脉粥样硬化易损斑块模型，分别口服给予K-80003或溶剂，收集颈动脉组织及血液样本，定量分析斑块大小，斑块性质以及血液中各种炎症因子及脂质的表达情况。在体外研究中，我们在巨噬细胞中考察了K-80003对7-酮胆固醇（7-KC）诱导的自噬及炎症反应的调控作用。.结果：与对照组相比，K-80003显著减少ApoE-/-小鼠颈动脉斑块面积，巨噬细胞含量以及各种炎症因子的表达水平，同时细胞核内p65表达阳性的细胞比例明显小降。体外实验表明，K-80003可明显逆转7-KC诱导的p65细胞核转位、IκBα表达下调以及NF-κB下游基因的mRNA 表达。此外，K-80003抑制NF-κB炎症信号活性主要通过增强自噬流，从而下调p62/SQSTM1的蛋白表达。进一步的机制研究发现，RXRα细胞浆转位与巨噬细胞自噬流受阻相关，体外过表达能特异定位于细胞浆的RXRα突变体RXRα/1-385可导致巨噬细胞自噬流受阻，同时K-80003能抑制7-KC诱导的RXRα细胞浆转位。.结论：K-80003通过促进巨噬细胞自噬流，抑制p62/SQSTM1介导的NF-κB 炎症信号活性，最终抑制动脉粥样硬化不稳定斑块的形成。该研究说明，通过靶向RXRα介导的自噬-炎症信号通路可能代表了一种新的治疗动脉粥样硬化的策略。