调节SGK1对抑制应激反应导致的不良妊娠作用机制的研究

Stress profoundly compromises reproduction, particularly when experienced in early gestation. A large body of evidence has demonstrated that chronically high concentrations of glucocorticoids have adversely affected early pregnancy; but the molecular mechanisms mediating these effects are poorly understood.. Serum-and glucocorticoid-inducible kinase 1 (SGK1) plays an important role in response to stress. Recent studies have provided evidence that SGK1 as a mediator for the effects of cortisol. Our studies use a small molecule inhibitor for SGK1, and down-regulation SGK1 to counteract the cortisol-induced reduction in stress. To research the mechanism of stress on conception, after induce by CORT, we knock-down SGK1, GR and inhibit SGK1 and GR expression in RL95-2-Bewo, to detect adhesion and expansion of BeWo spheroids. Moreover, we use human endometrial epithelial cells are co-cultured with human blastocyst stage embryo to research embryo attachment after CORT inducing. At last, we investigate the IVF-ET mice in different stressor, and embryo transfer with SGK1 inhibitor to induce stress effect. On Day 7, we observe the embryo implantation rate, and the expression of SGK1, GR, Lif, HB-EGF,αvβ3,et al. . Stress-induced pregnancy failure, but unsurprisingly they are not yet fully appreciated. Our findings will allow us to elucidate the mechanisms of embryo attachment and provide benefits for assisted reproductive technology success rates.

应激反应是导致妊娠不良的一项重要原因，但应激影响妊娠的分子机制，目前尚不清楚。神经细胞的研究证明，应激导致SGK1表达变化从而影响神经细胞的增殖分化；对子宫内膜的研究表明，SGK1影响胚胎着床。我们推断受应激胁迫的患者子宫内膜细胞中，CORT导致GR转录水平升高，而GR升高进一步导致SGK1的表达升高，影响了胚胎着床，最终导致妊娠不良。此推断尚待本项目实验研究证实。本项目采用RL95-2-BeWo和人胚胎与原代子宫内膜细胞共培养模型探讨SGK1受应激影响的变化及其对妊娠的作用机制；采用CORT诱导体外模型，通过抑制剂拮抗或基因敲降等调节SGK1及GR表达，研究其对体外共培养模型胚胎粘附率的影响。同时利用小鼠模型，将筛选的抑制剂在其体内进行验证，检测胚胎着床率等，揭示SGK1与胚胎着床分子的相关性。最终，验证和揭示应激导致妊娠不良的分子机制及探索分子层面的控制手段，降低应激导致的不良妊娠率。

应激反应是导致妊娠不良的一项重要原因，但应激影响妊娠的分子机制，目前尚不清楚。对神经细胞的研究证明，应激导致SGK1基因表达变化从而影响神经细胞的增殖分化；对子宫内膜的研究表明，SGK1水平直接影响胚胎着床。我们推断受应激胁迫的患者子宫内膜细胞中，CORT导致GR转录水平升高，而GR升高进一步导致SGK1的表达升高，影响了胚胎着床，最终导致妊娠不良。.本项目采用RL95-2-BeWo子宫内膜细胞共培养模型探讨SGK1受应激影响的变化及其对妊娠的作用机制；采用CORT诱导体外模型，通过抑制剂拮抗或基因敲降等调节SGK1及GR表达，研究其对体外共培养模型胚胎粘附率的影响。同时利用小鼠模型，将筛选的抑制剂在其体内进行验证，检测胚胎着床率等，揭示SGK1与胚胎着床分子的相关性。实验结果显示，沉默GR、SGK1后，RL95-2-BeWo共培养体系中模拟胚胎的Bewo球体粘附率和扩展率均显著降低；GR和SGK1基因同时沉默，Bewo球体粘附率与扩展率降低更显著。说明GR、SGK1影响了胚胎粘附和胚胎种植能力，在胚胎着床中发挥重要的影响作用。动物实验结果表明，妊娠期母体高水平的糖皮质激素使小鼠妊娠中期吸收胎数目显著增加，胎盘组织形态发生显著性改变，与胎盘糖皮质激素代谢功能密切相关的mRNA和蛋白表达发生了改变，提示高水平糖皮质激素导致胎盘功能障碍。复苏周期患者心理状况及内膜准备对妊娠结局影响的临床研究发现，焦虑/抑郁评分越高，受精数、受精率、2PN 受精数、可用胚胎数、优质胚胎率、临床妊娠率越低，越不容易受孕。因此对有严重焦虑和抑郁的患者，胚胎移植前应关注其心理状况，必要时进行心理治疗，对伴有焦虑和/或抑郁患者应联合配偶进行，以达到改善婚姻质量，增加妊娠率。