缺血损伤相关的新生表位在移植术后体液性排斥中的作用及机制研究

With the transformation of donor source in China, the problem of ischemic injury in donor is becoming increasingly obvious and attracting more and more attention. Recent studies have showed that ischemic injury can make cell surface produce neo-epitopes, and then aggravate ischemia-reperfusion injury. We hypothesize that, as an inevitable part of organ transplantation, the accompanying neo-epitopes may also play an important role in humoral rejection after transplantation. First, this project plans to determine the correlation between donor ischemia time and the humoral rejection after organ transplantation through murine isogenic and allogeneic heart transplantation. Secondly, this project plans to trace neo-epitopes specificity B cell related to ischemia injury through MHC-II-peptide tetramer. Besides, the project studies the cytological changes and immunological mechanisms during activating humoral immune system caused by neo-epitopes after ischemia injury. Finally, this project plans to use CTLA-4Ig to block Tfh activation and its auxiliary B cell activation at different time points after ischemia injury, and then observe the influence of inhibiting neo-epitopes specificity B cell at different time points after ischemia injury on humoral immunity after secondary immune. We hope to further reveal the potential problems in the process of donor transformation, and provide new strategies for the maintenance and selection of donors through the above research.

随着我国供体来源的转型，供体的缺血损伤问题越来越显著，也越来越受到重视。近期研究发现，缺血损伤会损伤磷脂膜和部分蛋白结构，导致细胞表面产生新生表位，继而加重缺血再灌注损伤。我们推测，作为器官移植过程中不可避免的一部分，其相伴产生的新生表位可能在移植术后体液性排斥反应中也发挥着重要的作用。.本课题计划通过小鼠同基因及异基因心脏移植确定供体缺血时间与器官移植术后体液性排斥反应的相关性；继而利用MHC-II-肽四聚体追踪缺血损伤相关新生表位特异性B细胞，研究缺血损伤后新生表位暴露在激活体液免疫系统过程中的细胞学改变及免疫学机制；最后，本课题计划在缺血损伤后不同时间点使用CTLA-4Ig阻断Tfh活化及其辅助的B细胞活化，观察缺血损伤后不同时期抑制新生表位特异性B细胞对再次免疫后体液性免疫的影响。通过上述研究，我们期望能进一步揭示供体转型过程中可能存在的问题，为供体维护和选用提供新的策略。

缺血再灌注损伤是影响器官移植术后受体发病率和死亡率的重要原因。我们在前期研究中发现，细胞在缺血再灌注损伤的过程中会产生新的抗原表位，然后引起机体产生获得性免疫分泌抗体与之结合进而加重再灌注损伤。这些缺血损伤相关的新生表位所带来的危害可能并不局限于缺血再灌注损伤本身，可能也会诱发或加重器官移植后机体的体液性排斥反应。. 我们在本课题中采用小鼠多次肾缺血损伤模型验证了缺血损伤后新生表位的产生及相关抗体的分泌，并且证明缺血损伤会引发机体发生体液免疫应答，而早期缺血损伤期间抑制免疫反应可减轻二次缺血损伤。通过小鼠肾缺血+肾移植模型证实早期缺血损伤会导致移植术后体液排斥反应的发生进而加重移植物损害。在早期缺血损伤期间可通过应用T细胞抑制剂抑制B细胞向记忆性B细胞分化，从而抑制或弱化移植术后体液性排斥反应，减轻移植物损伤。在此基础上，我们为了发现临床上针对这一情况的具体干预措施，采用了多种手段针对体液免疫的不同阶段进行干预。眼镜蛇毒因子可通过抑制补体活化减轻移植肾病理损害，但不能抑制免疫细胞的活动；而CTLA4-Ig具有强大的抑制T细胞的作用，因而可通过抑制生发中心B细胞活化从而抑制记忆性B细胞的分化，对肾缺血+移植之后的体液性排斥反应具有抑制作用，从而减轻病理损害。而CTLA4-Ig和FTY720联用可以加强抑制体液性排斥反应。. 这些研究结果验证了缺血损伤相关新生表位的存在，并揭示了其影响体液性免疫系统的具体机制，进一步揭示了DCD转型过程中可能存在的问题，为维护DCD供体及术后免疫抑制剂用药提供新的理论基础和干预靶点。