基于“肾藏精”理论研究五子衍宗丸拮抗环磷酰胺毒性的分子机制

环磷酰胺是临床常用的烷化剂类代表药，但其骨髓抑制、生殖毒性等毒副作用仍是目前急需解决的难题；前期我们基于"肾藏精、主骨生髓化血、主生殖"理论，研究发现五子衍宗丸可显著减轻环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制、免疫低下、生精障碍等毒副作用。近期有研究显示，环磷酰胺的毒性机制与其致体内干细胞耗损有关；而中医理论研究认为，干细胞为"肾精"在细胞层次的存在形式，那么，补肾生精方- - 五子衍宗丸能否通过对干细胞损伤保护、促进干细胞增殖来拮抗环磷酰胺毒性呢？本项目拟采用流式细胞术、单细胞电泳、Real-time PCR、siRNA等实验技术，研究五子衍宗丸对干细胞（骨髓造血干细胞、精原干细胞）损伤保护作用和增殖促进作用，进而研究雌激素受体、Gdnf /Ret信号通路在五子衍宗丸对干细胞损伤保护与促进干细胞增殖中的作用，从而探讨五子衍宗丸拮抗环磷酰胺毒性的分子机制，为临床防治环磷酰胺毒副作用提供科学依据。

环磷酰胺是临床常用的烷化剂类代表药，但其骨髓抑制、生殖毒性等毒副作用仍是目前急需解决的难题。本课题组前期研究发现五子衍宗方可显著减轻环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制、生精障碍等毒副作用。然而，其确切分子机制尚未明确。本项目是在成功建立环磷酰胺致生精障碍小鼠模型的基础上，利用现有的分子生物学技术平台，研究五子衍宗方对生殖细胞损伤的保护作用，为临床防治环磷酰胺毒副作用提供科学依据。本项目在国内外首次研究表明，五子衍宗方可保护环磷酰胺所致的生殖细胞DNA损伤，增加精原干细胞数量；并研究了五子衍宗方对睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用和抗凋亡分子机制，结果表明五子衍宗方不仅可通过上调SOD和GPX活性，降低MDA和8-OHdG含量增强机体的抗氧化能力，还可通过上调Bcl-2蛋白表达，下调Bax及其下游效应蛋白Caspase-3表达显著抑制生殖细胞的凋亡；五子衍宗方还可通过调节p-53，p21，53BP1等蛋白表达促进生殖细胞DNA损伤的修复。其次，我们初步探讨了五子衍宗方总黄酮和总多糖对生精障碍小鼠的保护作用及机制，结果表明，五子衍宗方总黄酮和总多糖都能有效拮抗环磷酰胺所致的小鼠生精障碍，其分子机制与提高机体抗氧化能力，抑制生殖细胞凋亡和促进DNA损伤修复有关。最后，我们研究了五子衍宗方对环磷酰胺所致骨髓抑制和肝脏损伤的保护作用，结果发现五子衍宗方可通过减轻骨髓细胞DNA损伤，增加骨髓造血干细胞数量拮抗环磷酰胺所致的骨髓抑制，也可通过提高机体抗氧化能力减轻肝脏组织细胞DNA损伤和DNA断裂。该项目研究成果为临床防治环磷酰胺所致的毒副作用提供新的靶点及可能的候选药物，因此具有重要的理论意义和临床应用价值。