从GDNF/Ret、SCF/c-kit信号探讨淫羊藿总黄酮对精原干细胞增殖与分化的影响

男性不育症是影响男性生殖健康与人类繁衍的重大疾病，不育症的治疗仍是目前医学难题。精原干细胞的成功体外培养与移植技术为治疗男性不育症开辟了新的途径,但调控精原干细胞增殖与分化仍是目前的难点。淫羊藿总黄酮为中药淫羊藿主要药理活性部位，具有促进性腺激素分泌、提高睾丸生精功能等作用，但其对精原干细胞的作用还未有研究。在精原干细胞增殖与分化调节中，GDNF/Ret、SCF/c-kit信号分别起着关键作用。本项目拟在制备小鼠隐睾动物模型和离体培养小鼠睾丸精原干细胞、支持细胞基础上，运用流式细胞分析、Western-Blot、RT-PCR等技术，研究淫羊藿总黄酮对精原干细胞表达Ret、c-kit和支持细胞表达分泌GDNF、SCF等的影响，及对精原干细胞增殖与分化的主要信号- - GDNF/Ret、SCF/c-kit的作用，探讨淫羊藿总黄酮调控精原干细胞增殖与分化的作用，为临床治疗男性不育症提供新的思路。

男性不育症是影响男性生殖健康与人类繁衍的重大疾病，不育症的治疗仍是目前医学难题。淫羊藿总黄酮是淫羊藿主要活性成分，具有促进性腺发育、调节体内性激素水平和生殖功能等多种药理作用。淫羊藿总黄酮的药理作用提示其对男性不育症具有调节作用。本项目首先建立了隐睾与环磷酰胺致小鼠生精障碍模型，在此基础上研究淫羊藿总黄酮对小鼠生精障碍功能的改善作用及对精原干细胞增殖与分化作用的影响。同时，离体培养小鼠睾丸支持细胞，并探讨淫羊藿总黄酮对睾丸支持细胞分泌相关细胞因子作用。研究结果显示淫羊藿总黄酮能够增加小鼠的睾丸及附睾重量，提高精子密度与精子活率；改善小鼠睾丸组织的病理性变化，显著降低睾丸组织中的MDA含量，提高SOD和GPX活性，上调SOD2、SIRT3 mRNA的表达，调节氧化-抗氧化系统的平衡。在隐睾模型小鼠再固定术后，淫羊藿总黄酮能够有效恢复睾丸生精小管上皮结构，促进精原干细胞与初级精母细胞进一步分裂成次级精母细胞，并促进次级精母细胞向精子细胞的转化，恢复各级生精细胞百分比，显著增加小鼠睾丸中GDNFmRNA、SCF mRNA的表达。淫羊藿总黄酮上调离体培养的小鼠睾丸支持细胞中GDNF表达，对SCF表达影响不显著。在环磷酰胺致对小鼠生精障碍中，淫羊藿总黄酮可上调模型睾丸组织中SCF mRNA的表达，提高睾丸组织中SOD和GPX的活性以及降低MDA含量，调节氧化-抗氧化系统的平衡以及升高睾丸组织中Bcl-2的表达，降低睾丸组织中Bax的表达，上调骨髓有核细胞、T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞、NK细胞数量，拮抗环磷酰胺所诱导的生精细胞的凋亡。综合上述研究可以得出，淫羊藿总黄酮对小鼠隐睾及环磷酰胺所致生精障碍均具有保护作用，其保护作用机制可能与上调SIRT3表达与减轻氧化应激与细胞凋亡、调节GDNF/Ret和SCF/c-kit性号以调控的精原细胞增殖分化，从而保护精原干细胞并促进睾丸生精功能恢复相关。研究结果提示，淫羊藿总黄酮对多种原因所致睾丸生精功能损害具有良好的保护作用，其作用机制可能与对精原干细胞的保护作用及促进精原干细胞增殖与分化相关。本项目研究结果对临床运用淫羊藿治疗男性不育具有指导意义。