功能未知基因ALO50003在白血病耐药中的作用及其机制研究

我们先前基因芯片的研究发现功能未知基因AL050003，在难治性白血病和多药耐药细胞系K562-n/VCR中表达均显著上调，荧光定量PCR检测也发现其在难治性白血病中高表达。本研究拟从mRNA和蛋白水平对白血病标本进行扩大病例的分析，确认该基因与白血病治疗反应的关系。将该基因转入白血病细胞系K562-n中，明确该基因编码蛋白的亚细胞定位；检测基因转染后K562-n细胞对化疗药物敏感性的变化，利用RNA干扰抑制多药耐药K562-n/VCR细胞该基因的表达,观察对多药耐药的逆转作用；检测基因转染、RNA干扰前后细胞周期分布、对化疗药物诱导凋亡的敏感性，细胞膜药物泵的功能，P-gp、sorcin、bcl-2、bax、caspase-3的表达水平，细胞内钙离子水平等；利用酵母双杂交系统筛选可能的编码蛋白配体，初步明确其可能的作用机制。