小分子药物-功能蛋白结合常数测定新方法及结合作用表征新方法研究

亲合色谱是动态条件下研究小分子-生物大分子相互作用的重要手段。为克服目前仅以结合常数和结合位点为表征参数，且获取该参数的前沿色谱和竞争洗脱实验需要样品量大、实验周期长、干扰严重等亲和色谱研究中存在的主要问题，本项目结合前期研究工作，从分析药物与蛋白的作用平衡出发，提出一种测定小分子-生物大分子结合常数、结合位点的新理论以及相应的新实验方法。采用高活性和稳定性的定向固定化人血清白蛋白、beta2-肾上腺素受体和alpha1-酸性糖蛋白固定相，选择与这三种功能蛋白特异性作用的药物为溶质，验证新理论和新方法的正确性。再以结合常数、结合位点以及从结合部位释放的溶剂分子数等三个参数，综合表征药物与功能蛋白之间的相互作用，则有望建立一个新的小分子-生物大分子相互作用研究方法，为完善以亲和色谱为手段的小分子与生物大分子相互作用和药物筛选研究奠定理论基础。

结合常数是表征小分子-生物大分子相互作用的重要参数。前沿色谱和竞争洗脱法是获取药物-蛋白结合常数的传统色谱方法。本项目从分析药物与蛋白的作用平衡出发，提出一种测定小分子-生物大分子作用结合常数、结合位点数的新理论以及相应的新实验方法。采用高活性和稳定性的定向固定化人血清白蛋白、beta 2-肾上腺素受体和alpha1-酸性糖蛋白固定相，根据新理论和新方法测定了药物与这三种功能蛋白的结合常数和结合位点。通过与前沿色谱、竞争洗脱法和透析法等传统方法比较，验证了新理论和新方法的可靠性。本项目理论和方法的最大优点在于流动相中不添加药物，只要注射一系列浓度不同的药物就可以测定结合常数，克服了前沿色谱和竞争法因在流动相中添加药物而带来的样品消耗量大、实验周期长、干扰严重等亲和色谱研究中存在的主要问题。