果子狸源呼肠孤病毒感染小鼠及致病机制研究

The masked palm civet (Paguma larvata) has been suspected to be the host of a mammalian orthoreoviruses that causes severe acute respiratory syndrome in humans and many domestic animals. The palm civet lives wild and is farmed, but even though the species is a potential carrier of the virus. In this study, adult female 4 weeks old Balb/c mice were infected with MPC/04 reovirus, to interpret the basic virological and pathological response. Then, we use reverse genetic techniques to construct a set of isogenic recombinant viruses bearing variant σ1 or μ1 to analyze the role of σ1 and μ1 protein heterogeneity in pathogenic mechanism of MPC/04, and clarifying the genetic basis of pathogenicity. This study might be providing clues for future exploration of understanding the pathogenic mechanism of mice infected mammalian orthoreoviruses.

野生哺乳动物果子狸可能是多种人兽共患病病毒的自然宿主，研究其所携带的呼肠孤病毒对于追溯人及家畜呼肠孤病毒病原意义重大。本项目拟以果子狸源呼肠孤病毒MPC/04株为研究对象，对病毒理化特性、生物学特性、细胞嗜性、对小鼠致病性等进行了详细的研究，阐明该毒株在小鼠体内复制特性、组织嗜性和致病性。并在此基础上，建立了反向遗传操作平台，构建重组病毒，研究呼肠孤病毒黏附蛋白σ1及μ1蛋白影响病毒复制、毒力及致病机制，分析重组病毒的致病性变化，阐明该基因在病毒毒力变异中所起到的作用，探索呼肠孤病毒毒力变化的分子基础。本项目为解析果子狸源呼肠孤病毒的生物学特性、系统进化分析、病毒致病机理的研究具有重要意义，同时为预防哺乳动物呼肠孤病毒的流行及果子狸作为病毒宿主可能导致疾病的传播奠定基础。

野生哺乳动物果子狸可能是多种人兽共患病病毒的自然宿主，研究其所携带的呼肠孤病毒对追溯人及家畜呼肠孤病毒病原意义重大。本项目以果子狸源呼肠孤病毒MPC/04株（MRV3型）为研究对象，对病毒理化特性、生物学特性、细胞嗜性、对小鼠致病性等进行了详细的研究，结果证实，该毒株细胞感染谱较广，显微镜观察和定量PCR检测均显示果子狸源呼肠孤病毒MPC/04株对不同来源细胞感染力存在不同程度的差异，对哺乳动物源细胞普遍具有感染力，但也存在增殖能力差异，对鸡源细胞系（DF1）几乎无感染力；BALB/c小鼠感染试验中，与1型MRV相比，MPC/04株通过滴鼻感染后7天表现66.7%的死亡率，且呈现典型的呼吸系统症状，剖检变化主要为肺脏出现水肿及严重的肉样病变；肺脏：呈间质性肺炎，间质变宽，肺泡隔增厚；间接ELISA方法进行血清抗体的检测，结果显示感染后MRV抗体呈阳性，空白对照小鼠血清呈阴性；组织复制差异分析显示，感染小鼠肺脏、肝脏、肠、脾脏、和脑组织在感染后3、5、7、14和21天后，肺脏中的病毒RNA含量可达到106copies/μl，B/03可达到105copies/μl。MRV 的σ1由S1 基因编码的病毒吸附蛋白，决定了毒株的细胞和组织趋向性。核苷酸序列分析发现，MPC/04株的L1,L2, M1 及 S3基因与人源BYD1株同源性最高(78.2–93.7%)， M3, S1, S2 与猪源MRV-HLJ/2007同源性最高(95.2–97.9%)。S1基因核苷酸分析结果显示，MPC/04株与3株国内分离的猪呼肠孤病毒亲缘关系最近，与美国2株对猪具有致死性的病毒同属血清3型。为解析果子狸源呼肠孤病毒的生物学特性、系统进化分析、病毒致病机理的研究具有重要意义，同时为预防哺乳动物呼肠孤病毒的流行及果子狸作为病毒宿主可能导致的疾病传播奠定基础。