壮药狗肝菜多糖（DCP）对肝纤维化TGF-β1/smad与p38MAPK信号通路的干预作用及其分子机制研究

Study of TGF-β1/smad and p38MAPK signaling pathways is etiological target of hepatofibrosis. And the targeted medication research associated with the pathways on liver fibrosis contributes to inhibiting fibrotic development. Notably, ethnopharmacology-derived Dicliptera chinensis has reported to effectively reverse fibrotic process of liver tissue in folk. In addition, our previous studies found that Dicliptera chinensis polysaccharides (DCP) resulted in attenuation of hepatofibrosis, inhibition of both TGF-β1 expression and p38MAPK phosphorylation. To further investigating the DCP anti-fibrotic effect involved in exact molecular mechanisms and intervention targets. This study first employs the DMN-induced liver fibrosis in rats to observe the effect of DCP on TGF-β1/smad and p38MAPK signaling pathways and the impact on proliferation and activation in hepatocytes. In addition, we also evaluate DCP-mediated inhibitory effect involved in proliferation and activation in HSC-T6 cell strain, and detection of its impact on TGF-β1 / smad and p38MAPK pathways, as well as the possible interaction targeted p300/CBP between these two pathways. Taken together, we aim to further identify the molecular mechanism of DCP-mediated anti-fibrotic effect and to provide the experimental and theoretical basis for its clinical application.

TGF-β1/smad和p38MAPK信号通路与肝纤维化发病密切相关。壮药狗肝菜在民间防治肝病方面有独到疗效，课题组前期发现狗肝菜多糖（DCP）能有效抑制二甲基亚硝胺（DMN）致大鼠的肝纤维化、并且抑制了TGF-β1的表达和p38MAPK的磷酸化水平。为深入研究DCP抗肝纤维化的具体分子机制及干预靶点，本课题在成功建立DMN致大鼠纤维化模型的基础上，研究DCP对TGF-β1/smad与p38MAPK 信号通路的作用及其对肝细胞增殖和活化状态的影响；同时研究DCP对大鼠HSC-T6肝星状细胞的抑制作用，并检测其对TGF-β1/ smad与p38MAPK 通路的影响，以及基于靶蛋白转录辅激活因子（p300/CBP）探讨两个通路之间可能存在的交互作用点，进一步明确DCP抗肝纤维化的分子机制，为其肝纤维化治疗的临床应用提供实验及理论依据。

药材狗肝菜在民间防治肝病方面有独到疗效，文献报道，TGF-β 1/smad 和p38MAPK 信号通路与肝纤维化发病密切相关，前期实验发现狗肝菜多糖（DCP）能有效抑制二甲基亚硝胺（DMN）致大鼠的肝纤维化、并且抑制了TGF-β 1 的表达和p38MAPK 的磷酸化水平。本研究基于此，深入研究DCP 抗肝纤维化的具体分子机制及干预靶点，本课题先后通过建立DMN 致大鼠纤维化模型的基础上，研究DCP 对TGF-β 1/smad 与p38MAPK 信号通路的作用的调控作用；同时研究DCP 对大鼠HSC-T6 肝星状细胞的抑制作用，并检测其对TGF-β 1/smad 与p38MAPK 通路的影响。研究结果发现，DCP具有显著的抑制肝纤维化作用，血清或肝组织中ALT、AST、ALP、GGT、HA、LN、PC-III、IV-C 水平显著降低；DCP干预后的肝组织或HSC-T6 肝星状细胞中a-SMA、TGF-β1、Smad2/3和 p-JNK，p-ERK，p-p38的蛋白或其基因表达被抑制，Smad7的表达得到促进，显示其作用机制可能与阻断 TGF-β1/Smads和p38MAPK 通路有关。此外，研究过程中同时发现，经DCP干预，肝组织或血清中ALT 、AST 、MDA 、SOD、HA，LN，PCⅢ，Ⅳ-C、TNF-α、IL-6和TGF-β1水平或含量降低或下降，COL-I, TGF-beta1, TIMP-1 和 NF-κB的蛋白表达抑制；HE和Masson 染色检测同时显示DCP可显著改善肝纤维化和抑制炎症，显示其机制与保肝、抗氧化、抗炎等有关。研究过程中，并未发现DCP具有任何毒副作用，且DCP对化学性、酒精性肝损伤，酒精性脂肪肝，结核药物性肝损伤均有显著的保护作用。在狗肝菜多糖化学结构研究方面，我们对其表征，和鉴别单糖（5种），并通过体内外研究了抗氧化作用，并予以证实。制剂方面，我们制备出狗肝菜多糖无糖颗粒剂和纳米脂质体。综上，本项目明确了DCP具有显著的保肝作用，明确了化学结构组成，初步明确DCP 抗HF的分子机制，为其HF治疗的临床应用提供实验及理论依据。