MiR-126调控S100A9通路介导类风湿关节炎关节损害的机制研究

Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic disabling autoimmune disease with high incidence. Progressive joint damage of RA is the major reason affecting survival quality of RA patients, but there is a lack of clear molecular mechanism and effective therapeutic targets. Our team found that an important microRNA miR-126 was highly expressed in RA synovial fibroblasts. Moreover we found miR-126 mediated the formation of RA joint damage through the construction of transgenic mice with skeletal system specific miR-126 knock out. With the aid of bioinformatics analysis, we found miR-126 had a strong and stable relationship with S100A9 which had an important role in RA joint damage. This research aimed to reveal the molecular mechanism of RA joint damage by illustrating the regulation of miR-126 on S100A9, and clarify the influence of miR-126 on RA joint damage by in vivo experiments, and finally provide new theoretical basis and drug targets.The project has high fundamental science and practical application value in the prevention and treatment of rheumatoid arthritis, and meanwhile helps to improve survival quality of RA patients and search for new drug targets.

类风湿关节炎（RA）是一种高发的慢性致残性自身免疫病，进行性关节损害是其影响患者生存质量的重要原因而目前尚缺乏明确的分子机制研究以及有效的治疗靶点。本课题组发现一个重要的微小RNA miR-126在RA滑膜成纤维细胞中高表达。通过构建骨骼系统特异性敲除miR-126的转基因鼠，我们发现miR-126介导RA关节损害的形成。我们利用生物信息学分析发现miR-126与一种在RA关节损害中发挥重要作用的蛋白S100A9存在稳定的相互关系。本项目拟通过阐明miR-126对S100A9通路的调控作用揭示RA关节损害的分子机制，并通过转基因模型等在体实验，从动物水平明确miR-126对RA关节损害的影响，为类风湿关节炎关节损害的治疗提供新的理论基础及药物靶点。本项目对类风湿关节炎的预防、治疗，提高患者生存质量，以及寻找新的药物靶点具有较高的基础科学及实际应用价值。

目的：类风湿关节炎(RA)是一种高发的慢性致残性自身免疫疾病，进行性关节损害是其影响患者生存质量的重要原因。S100A9和核因子-κB 受体活化因子配体（RANKL）已被证实在RA骨及软骨破坏中发挥重要作用。MiR-126-5p和miR-106b在肿瘤中发挥重要作用，但在类风湿关节炎中的表达及作用尚无报道。.方法：我们分别收集了类风湿关节炎（RA）、骨关节炎（OA）患者的滑膜组织作为实验组及对照组，利用原代培养的成纤维样滑膜细胞（FLS）进行基因芯片检测。通过Real-time PCR、原位杂交方法检测miR-126-5p和miR-106b在滑膜组织及FLS中的表达情况；利用Real-time PCR、Western Blot、免疫荧光检测S100A9、RANKL、TNF-α、IL-6等因子在滑膜组织及FLS中的表达。通过荧光素酶报告基因系统明确miR-126-5p对S100A9以及miR-106b对RANKL的调控作用。利用TALENT技术构建过表达和敲除miR-126-5p和miR-106b的滑膜细胞稳定株，通过MTT法、Transwell小室法和流式细胞术检测其对RASFs增殖、侵袭及凋亡的影响。最后利用类风湿关节炎小鼠模型进一步证实miR-126-5p和miR-106b在类风湿关节炎关节损害中的作用。.结果：我们通过类风湿关节炎基因芯片分析发现miR-126-5p和miR-106b在类风湿关节炎滑膜中表达降低，而进一步RA滑膜标本qRT-PCR及Western Blot检测也证实两者在RA中显著降低。生物学信息学分析以及荧光素酶检测证实miR-126-5p可直接调控S100A9，miR-106b可直接调控RANKL表达。通过构建miR-126-5p和miR-106b过表达的RA滑膜细胞稳定株，我们发现miR-126-5p或miR-106b过表达均可抑制RA滑膜细胞的增殖能力及骨破坏能力。对小鼠RA模型进行miR-106b干预可显著抑制RA关节损害。.结论：MiR-126-5p和miR-106b在RA关节损害过程中发挥重要作用，miR-126-5p通过调控S100A9发挥作用，而miR-106b可直接抑制RANKL的表达。