宿主细胞内参与戊型肝炎病毒跨种间感染相关蛋白的筛选及鉴定

Hepatitis E virus is divided into 4 different genotypes, among which genotype I and II only infect human while genotype III and IV can infect both human and animal. Among the animals that host HEV, pig stands out as the major reservoir for HEV infection in humans. At present, the mechanism of interaction of different genotypes of HEV and theirs hosts has not been elucidated. In this study, based on the construction of swine liver cDNA library that can be used in the cytotrap SOS Yeast Two-hybrid System, we aim to screen the proteins which interact with the capsid proteins of the 4 genotypes of HEV, meanwhile we will clone the homologic genes from human. Then the aimed protein from both swine and human will be expressed in insect cell, extracted and purified to investigate their interaction with the recombinant proteins of HEV capsid proteins. Then the block reaction of the aimed proteins to the HEV infection will be investigated. This study will be helpful for elucidating the mechanism of cross-species infection and pathogenic mechanism of HEV.

戊型肝炎病毒（HEV）四种主要基因型中，I型和II型只感染人，而III型和IV型为人畜共患，在自然界有多种宿主，其中猪是主要携带者，成为HEV天然蓄池，是人感染HEV的感染源。目前，HEV不同基因型的宿主选择差异及跨种间感染分子机制尚不清楚；本研究在成功构建适用于Cytotrap 酵母双杂交系统的猪肝细胞cDNA文库的基础上，利用四种不同基因型HEV的重组衣壳蛋白为诱饵，从该cDNA文库中筛选HEV互作蛋白，比较分析四种基因型的筛选结果，选取若干目的基因并克隆人源同源基因，构建杆状病毒重组载体，在昆虫细胞内表达并纯化目的蛋白，利用免疫共沉淀实验验证目的蛋白与重组HEV衣壳蛋白的相互作用，用易感细胞病毒感染阻断实验验证目的蛋白是否具有阻断HEV感染宿主细胞的作用；从而找出宿主细胞内参与HEV跨种间感染的相关蛋白分子；该研究对揭示HEV跨种间感染的分子机制及戊型肝炎的发病机理具有重要意义

戊型肝炎病毒（HEV）四种主要基因型中，I型和II型只感染人，而III型和IV型为人畜共患，在自然界有多种宿主，其中猪是主要携带者，成为HEV天然蓄池，是人感染HEV的感染源。目前，HEV不同基因型的宿主选择差异及跨种间感染分子机制尚不清楚；本研究在成功构建适用于Cytotrap 酵母双杂交系统的猪肝细胞cDNA文库的基础上，利用四种不同基因型HEV的衣壳蛋白为诱饵蛋白，从猪肝cDNA文库中筛选了不同基因型HEV互作蛋白；比较分析了不同基因型HEV筛选结果，选取CYP450 2C49作为目的蛋白，构建重组表达载体，表达并纯化目的蛋白；利用免疫共沉淀实验验证了CYP450 2C49及其人源同源蛋白CYP2C18与重组HEV病毒衣壳蛋白的相互作用；利用病毒阻断实验验证了CYP450 2C49及其人源同源蛋白CYP2C18具有减弱HEV对易感宿主细胞的感染效果。本研究初步阐明猪肝细胞蛋白CYP450 2C49及其人源同源蛋白CYP2C18可能是参与HEV跨种间感染的关键蛋白分子；该研究对揭示HEV跨种间感染分子机制具有重要意义；并为研制戊肝靶向治疗药物和多肽疫苗提供理论基础。