PEAR1通过非COX1相关通路对阿司匹林抗血小板疗效影响的研究

Aspirin resistance can increase the risk to thromboembolism, the pathway indirectly related to COX1 was one of most important factors. The GWAS and candidate genes researches have indicated that PEAR1 was important genetic factor of variability of platelet aggregation related to COX1 indirectly pathway. So, we may raise our hypothesis, the polymorphisms in PEAR1 may be an important factor and new mechanism to aspirin resistance through influencing the platelet aggregation. There have no similar research on this hypothesis. First, this study will screen the PEAR1 common polymorphisms in Chinese Han population by DHPLC, and elucidate the mechanism of the functional changes of polymorphisms by in vitro experiment. Second, We will illuminate the effect of polymorphisms in PEAR1 to aspirin pharmacodynamics by clinical trial both in healthy volunteers and patients. The last but not the least, we will detect the phosphylation before and after inhibitor of different pathway incubated, and to locate the PEAR in the pathway of platelet aggregation. To sum up, this study will propose a new idea in mechanism of aspirin resistance, and will promote the PEAR1 function research.

阿司匹林抵抗造成心血管栓塞事件危险升高，研究发现阿司匹林抵抗现象遗传度高，且主要来源于非COX1相关通路。通过GWAS及候选基因法发现PEAR1是决定非COX1相关通路血小板聚集反应变异的重要遗传因素。因此，PEAR1基因多态性极可能通过影响血小板反应性,而成为阿司匹林抵抗的重要因素及新机制。本研究首先用DHPLC法筛选中国汉族人群PEAR1基因多态性，并在细胞试验中阐明多态性改变功能的机制；然后，通过健康受试者试验和综合众多临床因素的患者体内试验中，充分阐明PEAR1基因多态性在抗血小板药物抵抗中的作用及机制；最后，在离体孵育试验中研究不同致聚剂及不同通路抑制剂对PEAR1蛋白磷酸化的影响，为PEAR1在血小板聚集网络通路中初步定位，为PEAR1多态性影响阿司匹林抗血小板疗效提供机制理论研究支持。通过本研究将为阿司匹林抵抗机制提供新思路，为进一步研究PEAR1在血小板聚集中作用打基础。

血栓栓塞疾病随着经济水平提高，其导致的心肌梗死、脑梗死等死亡率已经成为各疾病之首。而阿司匹林、氯吡格雷是广泛应用的抗血栓药物，但仍有患者在规范用药的基础上仍然出现药物反应低下或无反应，即阿司匹林和氯吡格雷抵抗。寻求其抵抗机制对临床治疗及药物开发存在具体意义。PEAR1是通过GWAS和候选基因法研究发现的影响血小板聚集功能的最相关基因之一，其多态性很可能与阿司匹林和氯吡格雷抵抗相关。我们依据已有报道和生物信息学分析，选择特定基因多态性进行了健康受试者研究，并收集病人资料和标本进行了相关性研究。我们发现PEAR1的多态性rs12041331多态性携带者与ADP、肾上腺素和胶原引发的血小板聚集有关，而与花生四烯酸引发聚集无关。在服用氯吡格雷后，各致聚剂引起的血小板聚集均下降，但在PEAR1不同基因型间无明显差别。而服用阿司匹林后，ADP和肾上腺素诱发的血小板聚集在突变纯合子个体更明显。提示我们PEAR1多态性确与基础血小板聚集有关而且与阿司匹林作用后的聚集有关，支持我们可以进一步在临床患者体内验证。我们共收集832名服用氯吡格雷和阿司匹林的患者血样和资料，有257名患者有规律的回访记录，因此，我们仅对此257名患者的18个通过文献或生物信息学分析预测的功能性PEAR1多态性进行分型。共有199名患者有完整的基因分型和回访记录，而且rs11810069,rs1952294,rs4661071在检测人群中未发现突变携带者，从统计分析中剔除。与以往文献报道和我们健康受试者中结果一致的是我们发现CYP2C9与ADP抑制率有关，rs12041331突变携带者其花生四烯酸引发聚集降低，而且我们还发现更多PEAR1基因突变与治疗30天后花生四烯酸和/或ADP引发聚集，即阿司匹林和/或氯吡格雷疗效有关。