HGF/MET通路影响索拉非尼抗肝癌疗效的作用及机制

The most important factors affecting sorafenib and other angiogenesis inhibitor treatment efficacy were drug resistance and metastasis. Our previous study revealed that HCC patients with high level of p-MET (phosphorylated MET) may associated with clinically resistance to sorafenib treatment. In experimental metastasis models, low-does sorafenib treatment promoted metastasis in the lung and liver, and accompany with activation of MET. These results indicate that HGF/MET pathway is involved in sorafenib resistance and pro-metastasis. This project will further use in vitro and in vivo model to clarify the relationship of HGF/MET pathway with sorafenib treatment resistance and metastasis in HCC. The main works include: 1) Comparing sorafenib treatment affect HCC cells proliferation, apoptosis, migration and invasion, etc. after activation or inhibition of HGF/MET pathway, and confirmed the results in nude mouse xenograft and metastatic models. 2) The mechanism of HGF/MET pathway antagonize sorafenib pro-apoptosis efficacy in HCC cells. 3）The mechanism of HGF/MET pathway antagonize sorafenib antiangiogenic effect. The final goals are clarify mechanism of HGF/MET pathway for sorafenib resistance and promoting metastasis in HCC. Providing effective molecular target for improving the efficacy of sorafenib against HCC.

耐药和转移是影响包括索拉非尼在内的血管激酶抑制剂疗效的最重要因素。我们前期的研究表明肝癌磷酸化MET (p-MET) 表达阳性与索拉非尼耐药有关，低剂量索拉非尼会促进裸鼠转移瘤模型肺和肝脏中转移灶形成，免疫组化证实与p-MET过表达有同步性，提示HGF/MET通路有可能参与索拉非尼耐药和促转移作用。本项目将进一步利用体外和体内模型系统阐明HGF/MET通路在索拉非尼治疗肝癌中与耐药及转移的关系。主要工作包括：1）比较肝癌细胞HGF/MET通路通路激活或抑制后索拉非尼对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力等恶性生物学特征的影响，并在裸鼠皮下移植瘤及转移瘤模型上加以证实；2）肝癌细胞中HGF/MET通路拮抗索拉非尼促凋亡作用的机制；3）HGF/MET通路拮抗索拉非尼抑制血管生成的作用及机制。最终阐明HGF/MET通路在肝癌中对索拉非尼耐药和促转移的作用机制，为提高索拉非尼抗肝癌疗效提供有效分子标靶。

本次获得资助后认真执行计划书内容，主要完成以下两部分研究：1）发现在索拉非尼处理的肝癌细胞中添加HGF可以激活MET及其下游的AKT和ERK1/2通路。从而使肝癌细胞对索拉非尼产生耐药，拮抗其对肝癌细胞的抗增殖，迁移和侵袭能力。此外，我们发现HGF作用肝癌细胞后可以刺激EGR1表达，其参与了肝癌细胞对索拉非尼耐药。进一步的研究还发现HGF诱导的索拉非尼耐药可以通过MET抑制剂PHA-665752或干扰EGR1表达来逆转耐药。因此，抑制HGF/MET通路可以改善肝癌对索拉非尼耐药，对其联合应用治疗索拉非尼耐药肝癌值得进一步研究。2）我们发现Tivantinib非选择性的抑制MET通路依赖性肝癌细胞及MET通路非依赖性肝癌细胞增殖。Tivantinib在肝癌细胞中既不能抑制磷酸化的MET表达，也不能抑制HGF刺激性的MET磷酸化。微管聚合实验表明，Tivantinib可以作为一种微管解聚合剂来抑制细胞微管结构的稳定性。进一步的研究证明Tivantinib可以使肝癌细胞阻滞于G2/M期，并通过内源性和外源性凋亡通路促进细胞凋亡。在肝癌荷裸鼠瘤模型中，Tivantinib也通过抑制肿瘤增殖，促进肿瘤凋亡表现出良好的抑瘤疗效。