EB病毒LMP1诱导的组蛋白H3磷酸化在鼻咽癌变中的作用及分子机制

研究表明EB病毒编码的潜伏膜蛋白1（LMP1）在鼻咽癌的发生中起十分重要的作用，而组蛋白磷酸化修饰是细胞内基因转录调控的关键性环节之一。 本项目拟研究LMP1诱导组蛋白H3磷酸化和参与的蛋白激酶，以及这种改变在鼻咽癌变中的作用及分子机制。采用磷酸化特异抗体检测组蛋白H3在人鼻咽炎症和癌变组织及鼻咽上皮永生化细胞株NP69和鼻咽癌细胞株中的表达；用pSG5和pSG5-LMP1质粒分别转染NP69细胞，探测LMP1所诱导的H3位点特异磷酸化水平改变及激酶RSK2和MSK1活性；采用LMP1质粒转染稳定高表达H3、基因沉默和位点突变的NP69细胞株，筛选出LMP1和H3不同组合的多种稳定表达细胞株。检测其细胞生长、增殖、集落形成及裸鼠体内成瘤能力的改变。本项目的完成可回答组蛋白H3磷酸化水平是否可成为鼻咽癌的诊断及预后的分子指标之一，也将进一步完善EB病毒在鼻咽癌变中作用的分子机制。

鼻咽癌是高发于我国南方和东南亚地区的一种头颈部恶性肿瘤，其病因主要与Epstein-Barr病毒感染、遗传因素及环境因素有关。鼻咽癌独特的病因体系提示：鼻咽癌是研究肿瘤表观遗传修饰的最佳模型之一。EBV潜伏性膜蛋白1（LMP1) 在鼻咽癌发生中具有重要作用，而组蛋白磷酸化修饰是细胞内基因转录调控的关键环节之一。本课题以组蛋白H3磷酸化为切入点，从组织、细胞和分子水平研究组蛋白H3磷酸化在鼻咽癌变，尤其是在EBV-LMP1促进鼻咽癌细胞恶性表型中的作用，并探讨调控组蛋白H3磷酸化的蛋白激酶及信号通路。本项目研究结果显示，（1）组蛋白H3Ser10磷酸化水平在鼻咽癌组织中明显增高，并且与EBV-LMP1的表达呈正相关关系；（2）EBV-LMP1能诱导鼻咽癌细胞有丝分裂间期组蛋白H3Ser10磷酸化；（3）组蛋白H3，尤其是Ser10磷酸化，在LMP1促进CNE1细胞增殖和转化中起重要调控作用；（4）蛋白激酶MSK1调控LMP1诱导的组蛋白H3Ser10磷酸化；（5）蛋白激酶MSK1介导LMP1促进的鼻咽癌细胞增殖和转化；（6）TAK1通过激活p38/MSK1通路参与调控LMP1诱导的组蛋白H3Ser10磷酸化。本项目的完成将有助于从表观遗传学角度揭示LMP1的致瘤机制和鼻咽癌的发生机制，为组蛋白H3磷酸化作为鼻咽癌诊断和治疗的新靶标提供一定的实验依据。