基于生物信息学和分子生物学研究探讨microRNA调控干扰素诱导基因IFIT4表达的分子机制

IFIT4在狼疮患者中高表达且与病情相关，具有重要致病作用。我们的前期实验表明：IFNα通过顺序激活PI3K/mTOR－PKCδ-JNK-Stat1而上调IFIT4的表达。MicroRNAs(miRNAs)是不编码的小RNAs,在基因调节中发挥重要的负向调控作用，是目前国际上研究热点。为深入探讨IFIT4的表达调控机制，本项目拟用miRNAs文库和芯片筛选调控IFN上调IFIT4表达的miRNA；生物信息学方法和Northern-blot、qRT-PCR、RPA、luciferase基因报告系统等验证调控IFIT4表达的miRNA及靶位点；构建miRNA的过量表达载体和突变靶基因表达载体转染细胞，或合成miRNA的前体和抑制物，通过上调和下调miRNA后，研究miRNA调控IFIT4表达的信号通路及其在增殖凋亡的作用机制；同时探讨其在狼疮组织中的差异表达。这对探讨狼疮致病机制和寻找靶标。

系统性红斑狼疮发病机理复杂，I型干扰素通路的异常活化在SLE的发病中起着重要作用。IFN诱导的基因IFIT4在狼疮患者外周血高表达且与病情相关，提示IFIT4重要的致病作用。MicroRNAs(miRNAs)在基因调节中具重要的负向调控作用， 本项目拟探讨microRNA在IFIT4的表达调控机制及功能影响。研究发现：前期实验表明：狼疮患者与正常人之间外周血淋巴细胞中一组microRNA异常表达，干扰素刺激前后一组microRNA异常表达，miRNA146a在狼疮患者中低表达，与狼疮活动性SLEDAI呈负相关；miRNA21在狼疮患者外周血淋巴细胞高表达，与狼疮活动性SLEDAI呈正相关。在干扰素IFNa刺激下, miRNA146a高表达，miRNA21明显高表达。miRNA21抑制IFIT4和PTEN的表达，加入anti-miRNA21增加IFIT4和PTEN的表达，miRNA146a抑制IFN诱导IFIT4的表达。miRNA21增加IFN诱导的细胞凋亡。在STAT3和p65表达下调或缺失的条件下，IFN刺激后miRNA21的表达明显减少。提示stat3和p65参与IFN诱导miRNA21的表达.同时细胞凋亡明显减少。IFN诱导的AKT的磷酸化、stat3的磷酸化和PI3k亚单位p85的表达.miRNA21对Stat1表达无影响。miR-146a下调IFN诱导的stat1的表达从而下调IFIT4的表达。本项目结果对探讨狼疮致病和诊治分子机制，寻找药靶有重要意义。