基于体内过程的复方中药“左金丸”有效和/或有毒化学成分研究

以代表性、典型性名方"左金丸"为载体，串联中药体内过程，应用人肠内细菌模拟肠内环境研究"左金丸"生物转化成分；应用人源肠Caco-2细胞单层模型研究"左金丸"原型化学成分及其肠内细菌生物转化产物等的肠吸收难易及其吸收机制；应用肝脏药物代谢模型研究"左金丸"原型化合物及其肠内细菌生物转化产物的代谢及其与药物代谢酶细胞色素P450亚型的相互作用；应用MDR1-MDCK"细胞模型研究"左金丸"化学成分及其肠内细菌生物转化产物、肝脏代谢产物等的跨血脑屏障吸收和吸收与化学物质结构的关系及相互作用；应用人肾HK-2细胞模型研究"左金丸"化学成分及其肠内细菌生物转化产物、肝脏代谢产物等的肾毒性等，并与疗效进行关联，达到科学地确定"左金丸"有效成分的目的，以此有效成分为物质基础建立"左金丸"质量标准，为复方中药物质基础的研究提供新的思路和方法，为复方中药质量标准的制定提供示范性研究。

本项目在明确了“左金丸”化学成分的基础上，遵照中药口服给药的特点，串联了其体内过程。.首先发现“左金丸”生物碱类化学成分在人源肠内菌丛温孵体系稳定性良好；然后应用建立的用于中药复方物质基础研究的人源Caco-2细胞胶原包被6孔转运板体系，预测了“左金丸”中的18个化合物的肠吸收性，通过口服给药的血药浓度-时间曲线分析得到了12个生物碱为可吸收成分的结论。尽管肝微粒体可代谢转化吴茱萸碱、小檗碱和巴马亭，但代谢率低，判断原形化合物是潜在的效应成分。.应用MDR1-MDCK血脑屏障（BBB）细胞模型预测了可吸收成分透过BBB性，发现透过BBB的去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱是过氧化物酶体增殖物激活受体 (peroxisome proliferator-activated receptor，PPAR)激活剂，其中去氢吴茱萸碱活性最强；在肝脏吴茱萸碱向去氢吴茱萸碱的代谢转化，提高了去氢吴茱萸碱的浓度，提示其治疗神经性疼痛的潜力和“左金丸”用于脑病治疗的科学性。.对可吸收入血成分，评价了对人肝肿瘤Hep G2细胞系的细胞毒性。应用人源肾近曲小管上皮细胞（Human renal tubular epithelial cells，HK-2）系细胞模型评价了“左金丸”化学成分的肾毒性，探讨了构效关系。.“左金丸”黄连与吴茱萸的配伍比例为6:1，吴茱萸增加了黄连中生物碱的生物利用度；而“反左金丸”的黄连与吴茱萸的配伍比例为1:6，尽管吴茱萸的比例增加了，但并未增加去氢吴茱萸碱和吴茱萸碱的体内暴露量；但小檗碱类生物碱的吸收增加，从体内消除加快，最终表现为体内暴露程度增加。这一结论为中药复方应用的科学性提供了依据。.小檗碱、黄连碱、巴马亭、药根碱、表小檗碱、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱等应是“左金丸”质量评价的标志物。本项目以中药复方中代表性、典型性名方“左金丸”为载体，基于其物质基础的体内过程探讨其潜在的有效成分，为复方中药物质基础的研究提供了新的思路和方法，为复方中药质量标准的制定提供了示范性研究。本项目是我们提出的“基于体内过程的中药有效成分和有效效应物质的发现策略”和“基于体内过程的中药毒性成分和毒性效应物质的发现策略”的具体实施，对中药的“循证”研究和现代化及国际化具有深远意义。