土茯苓总黄酮对痛风相关尿酸盐转运蛋白和NALP3炎性体的调控研究

目前痛风发病率正以每年10%的速率递增，严重危害人类健康。现有抗痛风药物不仅种类少，且多数治标不治本，副作用明显。近年来，ABCG2/Bcrp1和GLUT9两个高效尿酸盐转运蛋白的首次发现，以及NALP3炎性体在痛风急性发作中心地位的首次证实，为痛风治疗药物的研制带来了新的契机。我们前期研究发现土茯苓总黄酮（TFSG）具有良好的降尿酸、抗痛风作用，并推测其机制是调控肾尿酸盐转运蛋白的表达和抑制NALP3炎性体的活化。本项目借助现代分子生物学技术，研究高尿酸血症小鼠肾mBcrp1、mGLUT9等尿酸盐转运蛋白表达的特点和规律，阐明TFSG对其的调控作用；借助RNA干扰和激光共聚焦显微成像手段，建立尿酸钠晶体诱导的细胞凋亡、氧化应激、K+外流、溶酶体破裂和NALP3炎性体活化之间的内在联系，阐明TFSG对NALP3炎性体在正常或减效基因表达细胞中的调控作用；以期为痛风的防治提供新靶点和新思路。

近年来，ABCG2和GLUT9等高效尿酸盐转运蛋白的发现，以及NLRP3（即NALP3）炎性体在痛风急性发作中心地位的首次证实，为痛风治疗药物的研制带来了新的契机。大量研究证实，中药在高尿酸血症和痛风的治疗方面有一定优势。土茯苓是治疗高尿酸血症和痛风的传统中药，目前仍停留在临床经验阶段，其药效物质和作用机制均不明确。课题组前期研究发现土茯苓总黄酮（TFSG）具有良好的降尿酸、抗痛风作用。本项目主要借助现代分子生物学技术，研究高尿酸血症小鼠和尿酸性肾病大鼠ABCG2、GLUT9等尿酸盐转运蛋白表达的特点和规律，以及尿酸钠晶体诱导的氧化应激等因素与NLRP3炎性体信号通路活化之间的内在联系，并阐明TFSG对其的多靶点调控作用。经过三年研究，已完成了项目计划书规定的研究任务，达到了预期的研究目标。主要研究内容和成果：（1）阐明了高尿酸血症小鼠肾脏尿酸盐转运蛋白的表达特点、规律，以及TFSG的调控作用。与正常组比较，高尿酸血症小鼠肾脏GLUT9、URAT1转运蛋白mRNA表达显著升高，OCT2、OCTN2 mRNA和蛋白质表达显著降低，TFSG对上述异常表达的转运蛋白均有显著调控作用。（2）为进一步阐述痛风相关尿酸盐转运蛋白的表达特点，课题组在研究计划之外，增加了尿酸性肾病大鼠模型，对ABCG2等尿酸盐转运蛋白mRNA和蛋白表达情况进行了研究。结果发现ABCG2、OAT1、OCT2、OCTN2等转运蛋白的mRNA和蛋白表达量显著降低，TFSG能够显著增加其表达量。（3）在痛风相关NLRP3炎性体的研究方面，课题组成功建立了靶向NLRP3的siRNA BMDMs细胞模型，并初步阐明了TFSG对其信号通路的调控。本研究中ABCG2、GLUT9转运蛋白，NLRP3炎性体等都有望成为痛风治疗药物开发的新靶点，并为中药多靶点防治痛风及其并发症的发生提供了思路。（4）本课题已经发表SCI收录论文2篇，EI收录期刊论文3篇，中文核心期刊论文3篇；另已投稿SCI期刊论文2篇，中文一级期刊论文2篇。参加国内学术会议2次并作专题报告，论文分获全国中医药博士后学术论坛优秀论文奖和长三角“中医药传承与发展创新”研究生论坛征文三等奖各1项。正在培养与本项目相关的硕士生2名。项目负责人在项目执行期间，入选浙江省“新世纪151人才工程”第二层次培养对象。