Toll样受体信号通路及miR-155在慢性乙型肝炎患者自然杀伤细胞功能失衡中的作用及机制研究

Natural kill (NK) cells play a pivotal role in innate immunity to defend Hepatitis B Virus (HBV) infection. Chronic HBV infection can suppress NK cells activation and induce selective function defects in NK cells. The mechanism remains unknown. Activation of Toll like receptors (TLR) could induce micro-RNA-155(miR-155) expression, and miR-155 may cooperate with cytokines (such as Interleukin-12 and Interleukin-18) to lunch NK cells activation. TLR pathway and miR-155 might participate in regulation on NK cells dysfunction in Chronic HBV infection. In the present study, we aim to perform an in-depth analysis of the relation between TLR pathway/miR-155 and NK dysfunction, and illustrate possible mechanism in between through in-vitro assays. The study would provide theoretical basis for targeting NK cell’s TLR pathway/miR-155 as a new drug research direction in treatment of Chronic HBV infection.

自然杀伤（NK）细胞在HBV感染的天然免疫防御中起重要作用。慢性HBV感染可抑制宿主NK细胞的活化，导致NK细胞发生选择性的功能缺陷，其机制尚未明确。Toll样受体（TLR）活化后诱导miR-155表达，miR-155可协同细胞因子(IL-12、IL-18等)介导NK细胞的活化，TLR信号通路与miR-155可能参与了NK细胞的功能调控。本课题拟利用临床样本，探讨慢性HBV感染患者外周血NK细胞TLR信号通路及其下游miR-155的表达与NK细胞功能失调间的关系；利用体外试验阐明TLR信号通路、miR-155参与调控慢性HBV感染NK细胞功能失调的可能机制。这将为靶向NK细胞TLR信号通路及miR-155治疗慢性乙肝的新方向提供实验和理论依据。

自然杀伤（NK）细胞在乙型肝炎表达（HBV）感染的天然免疫防御中起重要作用。慢性HBV感染可抑制宿主NK细胞的活化，导致NK细胞发生选择性的功能失衡，其机制尚未明确。miR-155是一种多功能miRNA，广泛表达于各种免疫细胞中，参与了天然免疫和适应性免疫的调控过程，但miR-155在慢性乙型肝炎(CHB)中的作用并不清楚。本研究利用临床队列探讨miR-155在CHB患者NK细胞中的表达变化及其在NK细胞功能失衡中的调控作用。研究发现，CHB患者外周血单个核细胞（PBMC）和NK细胞中miR-155的表达显著低于健康人，基线PBMC高表达miR-155可预测CHB患者对替比夫定抗病毒治疗52周更好的治疗应答；CHB患者NK细胞中miR-155的表达下调与NK细胞分泌IFN-γ能力下降相关；体外试验表明miR-155可通过靶向SOCS1途径抑制NK细胞IFN-γ分泌，但并不参与调控NK细胞的细胞毒性功能，导致NK细胞发生选择性功能失衡。此外，NK细胞表达多种Toll样受体（TLRs），可参与NK细胞的信号活化和功能调控。TLR8信号通路是肝脏内NK细胞分泌IFN-γ的最主要途径，在清除HBV感染中发挥重要作用，靶向TLR8信号通路可能是治疗CHB患者的新方向。CHB患者外周血NK细胞的TLR8信号通路表达变化及其与NK细胞功能失衡间的关系，目前尚不清楚。因此，本研究还探讨了慢性HBV感染对NK细胞TLR8信号通路的影响以及靶向TLR8信号通路对CHB患者NK细胞功能恢复的可能。研究发现，CHB患者NK细胞TLR8表达上调，通过NK细胞转录组分析发现CHB患者TLR8信号通路并未受抑制或上调，提示机体NK细胞可感知HBV并试图启动TLR8下游信号通路，但可能存在其他因素使NK细胞TLR信号通路无法有效活化导致NK细胞分泌IFN-γ能力下降；通过体外试验证实靶向TLR8信号通路可部分恢复NK细胞的功能，但TLR8激动剂单独刺激并不能有效活化TLR8信号通路，需要单核细胞分泌IL-12、IL-18等因子的协同作用才能诱导NK细胞分泌IFN-γ，提示TLR8激动剂可能需要联合其他方案用于治疗CHB。