糖基化在KSHV编码vGPCR致病机理中的功能研究

vGPCR is a viral oncogene encoded by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus (KSHV). It collaborates with other cellular and viral factors to trigger inflammation in the host, which is considered as a major cause for the KSHV related diseases such as Kaposi's Sarcoma (KS). The signaling transduction mediated by vGPCR has been extensively studied, however, there are few reports about the mechanism of its posttranslational regulation. We have elucidated in our previous study that the tyrosine sulfation at the N-terminal of vGPCR plays an important role in its tumorigenecity. Our preliminary data shows there exists N-linked glycosylation in this viral onco-protein, which is implied in the pathogenesis of the seven-span membrane receptor. We hypothesise that glycosylation of vGPCR plays an important role in its signaling and tumorigenecity and will carry out the following researches to verify it. 1. How glycosylation impacts the signaling of vGPCR. 2. How glycosylation functions in the tumorigenecity of vGPCR. 3. How glycosylation impacts vGPCR interacting with cellular factors. The data generated in this study will offer a new approach to the development of antiviral drug targeting vGPCR.

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）编码的G-蛋白偶联受体（vGPCR）是致癌基因，vGPCR与其它因子共同作用所介导的炎症反应被认为是卡波氏肉瘤（KS）等KSHV相关疾病的主要原因之一。有关vGPCR翻译后修饰的研究很少；我们之前阐明vGPCR的氨基端具有巯基化修饰，该巯基化修饰在vGPCR的致瘤性中具重要作用。我们最近发现vGPCR具有N-连接糖基化修饰，前期工作暗示该糖基化修饰对vGPCR的致病性具有重要影响。藉此，本研究提出糖基化修饰影响vGPCR信号传导和致瘤性的假设并拟开展如下研究：1.分析糖基化对vGPCR信号传导的影响；2.研究糖基化对vGPCR致瘤性的影响； 3. 分析及鉴定糖基化修饰对于vGPCR同它因子相互作用的影响。本研究将为研发以vGPCR为目标的抗病毒治疗方法提供理论支持，并为KSHV感染及相关疾病的防治提供新的依据。

研究背景、研究内容及科学意义.卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）编码的G-蛋白偶联受体（vGPCR）是致癌基因，vGPCR与其它因子共同作用所介导的炎症反应被认为是卡波氏肉瘤（KS）等KSHV相关疾病的主要原因之一。有关vGPCR翻译后修饰的研究很少；我们之前阐明vGPCR的氨基端具有巯基化修饰，该巯基化修饰在vGPCR的致瘤性中具重要作用。本研究发现vGPCR具有N-连接糖基化修饰，并对糖基化修饰与vGPCR的致病性的关联进行了系统研究：1.分析了糖基化对vGPCR信号传导的影响；2.研究了糖基化对vGPCR致瘤性的影响； 3. 分析及鉴定了糖基化修饰对于vGPCR同它因子相互作用的影响。本研究为研发以vGPCR为目标的抗病毒治疗方法提供了理论支持，并为KSHV感染及相关疾病的防治提供新的依据。..重要进展和关键数据：.•.vGPCR具有N-连接糖基化修饰；vGPCR四个潜在的糖基化位点都具有糖基化修饰。没有糖基化修饰的vGPCR突变体vGPCR-N0激活NF-KB和NFAT的能力明显下降；没有糖基化修饰的vGPCR突变体vGPCR-N0在裸鼠中的致瘤性明显下降。ERAD信号通道关键组分蛋白SEL1L能够结合vGPCR，并能诱导vGPCR的降解。.•.构建了携带vGPCR的重组小鼠γ疱疹病毒68 (MHV-68)，该重组病毒感染的小鼠能够形成同人类KS具有相似病理特征的病灶。该研究建立的啮齿动物模型，使得在病毒感染的真实条件下研究KSHV及EBV的致瘤性成为可能。.•.发现IKK-ε激酶能够磷酸化NFATc1并藉此抑制T细胞免疫反应。敲除IKK-ε或药理学上抑制IKK-ε促进了NFAT的活化，增强了T细胞抗病毒以及抗肿瘤的免疫力。该发现表明通过抑制IKK-ε激酶来提升T细胞免疫力是极具潜力的抗肿瘤研发途径。.•.ERAD信号通道关键组分蛋白SEL1L能够下调vGPCR所激活的信号通道，诸如：NFAT及NF-KB。.•.N-连接糖基化修饰也存在于低等脊椎动物天然免疫体系：青鱼干扰素及三倍体湘云鲫干扰素中都存在着N-连接糖基化修饰，然而糖基化修饰并不直接影响这些干扰素在宿主天然免疫中的抗病毒功能。RIG-I/MAVS/TBK1信号通道在低等脊椎动物天然免疫抗病毒（SVCV及GCRV）反应中起着至关重要的作用。