共聚焦显微内镜下胃癌MG-7在体分子成像

显微内镜分子成像技术作为在体诊断和治疗消化道早期肿瘤的新途径，近年来开始得到了广泛关注。本研究中①在探头式共聚焦显微内镜FIVE1系统协助下体外观察两种胃癌细胞系及一种正常胃黏膜上皮细胞系的MG7-Ag分子表达情况的共聚焦显微图像；②利用探头式共聚焦显微内镜FIVE1系统，实现对胃癌荷瘤小鼠MG7-Ag表达情况的体内分子成像；③在体外对人新鲜胃癌组织标本表面喷洒荧光标记的MG7抗体探针，利用探头式共聚焦显微内镜FIVE1和共聚焦激光显微内镜对其MG7-Ag的表达情况进行分子成像。本研究首次提出应用显微内镜技术模拟在体分子成像对胃癌进行定性和分型诊断的方法，为早期胃癌的分子诊断，胃癌分子靶向治疗的筛选均具有深远的意义。

本项目顺利完成了预期研究计划，在共聚焦激光显微内镜（CLE）MG7抗原在体分子诊断方面取得了如下成果：⑴流式细胞术检测结果显示本研究中所使用的BGC823和SGC7901胃癌细胞系均存在MG7-Ag的表达；CLE（FIVE1， Optiscan）图像显示细胞膜和胞浆的特异性荧光信号；即刻台式荧光显微镜观察结果与CLE相似。细胞免疫组化结果也验证了上述两种细胞系的细胞膜和胞浆中存在MG7-Ag的表达。⑵荷瘤鼠整体动态荧光成像观察结果显示，心内注射AF680-MG7抗体（1μg/g体重）避光饲养24小时后，小动物活体成像仪摄取的图像中即可见肿瘤部位出现特异性荧光信号。该肿瘤部位的特异性荧光信号在48小时达最强。CLE观察肿瘤表面均可见特异性荧光信号；体外免疫组化结果和台式荧光显微镜观察冰冻切片的图像与体内CLE图像相似。⑶共前瞻性纳入了46例新鲜的人组织标本，包括18例手术标本和28例内镜活检标本（来自23例胃癌患者）。23例胃癌组织标本中有22例在CLE实验中观察到了特异性荧光信号（+～+++），而非癌组织标本则无或仅有弱荧光信号（0或+，n=18，n=5）。CLE半定量分析结果与不同等级的免疫组化结果的相关性较好（Spearman r=0.87，P＜0.001）。CLE图像半定量分析方法的观察者间一致性较高（ICC=0.883，95%可信区间：0.819～0.929）。.此外，在本项目资助下，我们还在增强放大电子染色内镜（i-scan）在胃肿瘤方面的诊断作用，探头式CLE（pCLE）在食管癌筛查，以及溃疡性结肠炎的预后评估方面取得了进展。.在i-scan诊断胃粘膜疾病方面，共纳入43名患者，i-scan在胃肿瘤性疾病的定性和分级诊断方面均有较高的准确性。经对比，确定表面增强（SE）模式为最佳检查模式。.在pCLE食管癌筛查方面，共纳入42名患者。pCLE对鳞状上皮内瘤变的实时诊断敏感性、特异性和准确度分别为94.6%，90.7%和92.3%。观察者间一致性和观察者内一致性均较好（kappa值分别为0.699和0.895）。.溃疡性结肠炎预后评估方面，共纳入43名患者。其中经CLE判定为非活动性炎症的18名患者中仅有2名复发，而CLE判定为活动性炎症的25例患者中16例复发。具有显著的统计学意义（P<0.001）。