猪HEV ORF3蛋白表达与肥大细胞介质释放互作关系研究

本研究以长爪沙鼠为模式动物，运用细胞病理学和超微病理学、免疫组化和免疫电镜技术、Western Bloting、PCR和原位PCR技术，结合细胞培养技术，从一个新的视角来揭示HEV感染的机理。总体研究目标锁定于HEV感染过程中ORF3的蛋白表达与MC的互作关系，揭示HEV如何突破机体肠道黏膜免疫防线而引发感染造成机体肝炎发生的发病过程及其机制，在观察HEV感染过程中ORF3的蛋白表达在肠道和肝脏组织中定位的同时，采用形态与功能相结合，定性、定量、定位相结合，从研究肠黏膜和肝脏内的MC及其释放的局部炎症介质入手，结合其他相关免疫因子、细胞和肝脏中的T细胞、DC及枯否氏细胞及其相关分子成份的量变规律的观察，系统地、全方位地揭示HEV侵入过程中黏膜免疫系统与MC之间及细胞内化学信号转导机制与局部粘膜免疫功能之间的关系，进而进一步揭示黏膜免疫和MC及其分子在抗HEV感染中的功能作用和HE的发病机理

摘要，关键词，abstract，keywords。以深入浅出的语言简明扼要地概括出项目的精华，如背景、方向、主要内容、重要结果、关键数据及其科学意义等。关键词和keywords各不超过5个，并用分号隔开。. 本研究采用长爪沙鼠和兔作为HEV感染动物模型，运用细胞病理学和超微病理学、免疫组化和免疫电镜技术、Western Bloting、PCR和原位PCR技术，结合组织培养技术，从一个新的视角来揭示HEV感染的机理。 主要研究内容包括：1）观察研究了HEV感染过程中ORF3和ORF2的蛋白表达在沙鼠肠道和肝脏组织中的定位； 2）观察研究了肠黏膜和肝脏内的肥大细胞（MC）的分布定位及其释放的局部炎症介质（组胺、5-HT、Tryptase、等）成份的量变规律。3）初步探讨了HEV感染对动物肠道黏膜免疫的影响；4）系统观察了猪源HEV感染沙鼠的肝脏和肠道的组织病理学和超微病理学变化；5）初步观察了HEV感染过程中ORF2和ORF3的蛋白表达与肝细胞的细胞器内质网超微结构改变与功能之间的关系。6）首次发现了HEV与猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）和或猪圆环病毒2型（PCV2）混合感染的病例； 7）对北京、河北等地区的屠宰肉兔的HEV感染情况进行了检测观察，并进行了HEV试验感染兔的组织器官中HEV抗原的分布定位观察研究。8）初步开展了人工感染人源HBV 小鼠的病理学观察及检测工作。 . 本项研究重点揭示了两个方面的问题，第一是HEV感染可以引起消化道粘膜免疫结构和功能的明显改变，推断消化道粘膜免疫系统是抵抗HEV感染的重要屏障。第二，我们的研究结果表明，HEV感染能引起感染局部组织中肥大细胞数量增多，并释放大量的炎症介质TPSB2和5-HT，引发局部组织发生炎症反应，同时，由于肝脏的炎症引起肝脏糖代谢紊乱，肝糖原下降，以致肝脏的解毒功能降低，造成机体血清中SOD的活性降低，而MDA和iNOS的含量显著升高，造成机体抗氧化能力下降，引起组织细胞的变性、坏死，细胞凋亡过程加剧。另一方面，由于HEV感染激活了肝细胞的内质网应激相关分子，引起内质网应激，造成内质网结构和功能异常，G-6-P大量表达，以利于 ORF2和ORF3大量表达，以致HEV大量繁殖。这可能是HEV感染造成肝细胞损伤的重要机制。这两方面的问题都很值得进一步深入研究。