microRNA与猪AFS细胞及其分化细胞表面标志编码基因表达的互作机制研究

羊水来源干细胞（Amniotic Fluid-derived Stem Cells，AFS细胞）接近于胚胎干细胞，具有很大的治疗性应用前景。猪是研究人类疾病的最佳模式动物，我们已获得不同妊娠时期猪AFS细胞，并证实其具有增殖和分化潜能。microRNA（miRNA）是干细胞增殖和分化的关键调节者，是干细胞调节研究的一个重点。本研究采用RT-PCR技术检测AFS细胞及其分化细胞的表面标志，用RNA印迹检测AFS细胞及其分化细胞中miRNA的量、大小及丰度，经实时PCR检测miRNA的表达；用生物信息学和DNA芯片相结合的方法鉴定miRNA的靶基因，建立miRNA调控细胞表面标志编码基因表达的网络逻辑关系，解析特定miRNA在AFS细胞增殖和分化过程中的调控功能，阐明miRNA与AFS细胞及其分化细胞表面标志编码基因表达的互作机制，为用miRNA控制AFS细胞的分化及应用研究提供新的理论依据。

目前干细胞研究领域的焦点集中在以研究与治疗为目的的干细胞来源和细胞系方面。由于胚胎干细胞来源少以及伦理上的限制，研究者希望能够找到成体干细胞中发育年龄尽可能早的干细胞，或者说更接近于胚胎干细胞的成体干细胞。猪是研究人类疾病的最佳模式动物，本研究从猪胎儿羊水中分离培养出干细胞（Amniotic Fluid-derived Stem Cells，AFS细胞），并获得转EGFP基因AFS细胞；EGFP 可作为AFS细胞的示踪标记，为干细胞治疗奠定基础；研究证实，AFS细胞具有自我更新、增殖和多向分化潜能，非常接近胚胎干细胞的性能，不仅容易获取，而且避开了伦理学争议，同时具有很大的治疗性应用前景。此外，本项目获批技术专利一项，利用该专利技术可从羊水中分离培养出神经干细胞（Amniotic Fluid-derived Neural Stem Cells，AFNS细胞），证实其具有自我更新、增殖和多向分化潜能。AFNS细胞的获得，开辟了神经干细胞的新来源，这一成果具有重要的理论意义和应用价值。MicroRNA是干细胞增殖和分化的关键调节者，是干细胞调节研究的一个重点。本项目通过检测猪AFS细胞及分化细胞中表面标志和microRNA的表达，查明参与猪AFS细胞增殖和分化调控的microRNA，进而阐明microRNA与AFS细胞及其分化细胞表面标志编码基因表达的互作机制，为用microRNA分子来控制AFS细胞的分化或制备新的干细胞奠定基础，为揭示AFS细胞增殖和分化的基因调控机制及AFS细胞的应用研究提供新的理论依据。