TRIM62抑制禽网状内皮组织增生症病毒感染的分子机制

The reticuloendotheliosis virus (REV) mainly causes severe immunosuppression and tumor formation in poultry. There are no effective vaccines or drugs to prevent and control the virus. In the previous study, our team found that the innate immune regulator factor TRIM62 has a significant effect on inhibition of REV infection, but the molecular mechanism of inhibition is unclear. In this study, the TRIM62 domain is to be subjected to a series of mutations and its effect on viral transcription and release will be examined. Then the key domain of TRIM62 for inhibiting viral dependence, and suppressing viral elements and lifecycle stages are to be revealed. The interaction between the key domain of the TRIM62 and the suppressed viral element is to be detected, and the key loci of interaction is to be predicted. The key loci will be identified by detecting the effect of point mutants on viral infection. It’s clear that the key innate immune signaling pathways and signaling molecules regulated by TRIM62, proteins interacting with the signal molecules, and the upstream and downstream relationship between the signal molecule/interacting protein and TRIM62. The effect of TRIM62 key domain on its innate immune signaling pathway and signal molecule activity is to be determined. It provides theoretical basis for exploring new anti-avian retrovirus preparations and provides theoretical support and technical reserves for the prevention and control of REV and other avian retroviruses.

禽网状内皮组织增生症病毒（REV）主要引起禽群严重的免疫抑制和肿瘤形成，目前尚无有效疫苗或药物用以防控。我们在前期研究中发现，禽天然免疫调节因子TRIM62具有明显抑制REV感染的作用，但其分子机制尚未阐明。本研究拟通过对TRIM62结构域进行系列突变，检测其对病毒转录和释放的影响，揭示TRIM62抑制病毒依赖的关键结构域，以及被抑制的病毒元件和生命周期阶段；检测TRIM62关键结构域与被抑制病毒元件之间的相互作用，预测互作关键位点；检测TRIM62点突变后对其抑制病毒的影响，确定关键位点；明确TRIM62调控的关键天然免疫信号通路和信号分子、与信号分子互作蛋白，以及信号分子/互作蛋白与TRIM62的上下游关系；解析TRIM62关键结构域对其调控的天然免疫信号通路和信号分子活性的影响，为探究新的抗禽反转录病毒制剂提供理论基础，也为REV和其它禽反转录病毒的防控提供理论支撑和技术储备。

禽网状内皮组织增生症病毒（REV）主要引起禽群严重的免疫抑制和肿瘤形成，目前尚无有效疫苗或药物用以防控。我们在前期研究中发现，禽天然免疫调节因子TRIM62具有明显抑制REV感染的作用，但其分子机制尚未阐明。本研究通过构建体内、外REV感染模型，检测REV感染后不同时间点TRIM62表达变化，发现其表达均先上升后下降，病毒快速复制期是关键转折点；构建REV关键元件gag、env和pol蛋白质粒，转染DF-1细胞后，检测其对TRIM62表达的抑制作用，发现gag的作用效果最显著。通过构建TRIM62结构域缺失突变体，转染DF-1细胞后检测其对病毒转录和释放的影响，结果发现，TRIM62抑制REV的关键结构域作用影响大小为SPRY>RING> B-box>coiled-coil，且检测细胞上清中病毒含量，发现病毒粒子数量显著减少；通过免疫共沉淀和质谱分析与TRIM62互作蛋白，发现REV病毒的gag蛋白，揭示TRIM62依赖不同结构域，与病毒关键元件结合，抑制病毒的胞内组装和释放。通过对 与TRIM62互作蛋白进行分析和筛选，发现TRIM62对病毒gag蛋白p30区域的283-315位氨基酸有去甲基化修饰作用；选择ARPC5和Rab5b进一步研究，发现TRIM62抑制ARPCR5和Rab5b表达，而ARPCR5和Rab5b过表达促进病毒复制；ARPC5过表达时可以促进微丝的成核过程，促进细胞的运动，增加细胞间信号的传递；Rab5b过表达调控内含体途径，促进外泌体的形成和分泌，外泌体的分泌有利于病毒复制。综上，本研究证实了TRIM62通过调节ARPCR来调控肌动蛋白细胞骨架通路，调节Rab5b调控内含体途径，以及对病毒去甲基化修饰作用，多种方式和途径来达到抑制病毒复制的作用。为探究新的抗禽反转录病毒制剂提供理论基础，也为REV和其它禽反转录病毒的防控提供理论支撑和技术储备。