FOLR1通过调节EGR1及其信号分子参与鼻咽癌紫杉醇耐药的机制

The folate receptor 1 (FOLR1) is a member of surface glycoprotein with a very high affinity for folates. In the previous study, we reported that FOLR1 expression level was closely correlated to both proliferation of nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells and taxol-resistant in NPC cells, and Egr1 expression was postively co-related with FOLR1 expression. In this study, both parental NPC cell lines and taxol-resistant NPC cell lines will be used as subjects, and we aim to disclose the mechanism of taxol resistance in NPC cells through investigating Egr1 signal pathway. Firstly, expressional changes of Egr1 signal pathway would be detected by microarray while FOLR1 expression were changed in NPC cells. Phosphorylation activition of up-stream molecules would be detected by western blot;Activition of nuclear translocation would be detected by immunofluorescence assay; DNA binding activity would be detected by EMSA; This research proposal will elucidate the mechanism that FOLR1 regulates the Egr1 in taxol-resistance of nasopharyngeal carcinoma.

叶酸受体1（FOLR1）是细胞摄取叶酸的高亲和性受体，前期研究发现FOLR1的表达与鼻咽癌的发生及紫杉醇耐药表型密切相关，且早期生长反应因子1（Egr1）随FOLR1表达变化而变化。本项目将以鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系及相应的亲本细胞系为研究对象，从Egr1信号通路作用为切入点。应用cDNA microarray观察FOLR1表达变化对Egr1信号通路的影响；磷酸化抗体蛋白质杂交检测Egr1上游分子活化，免疫荧光共聚焦显微镜检查Egr1核迁移活性；EMSA检测Egr1的DNA结合活性；裸鼠体内观察FOLR1抑制后Egr1信号通路改变以及移植瘤对化疗的敏感性；在临床中收集鼻咽癌紫杉醇耐药标本和敏感标本，检测FOLR1及Egr1信号通路表达差异。该项目将阐明FOLR1如何通过调节EGR1信号通路参与鼻咽癌紫杉醇耐药的机制，为逆转耐药提供依据。

鼻咽癌是鼻咽部常见的恶性肿瘤，在我国头颈部恶性肿瘤中发病居首位，放疗、化疗是治疗鼻咽癌的主要手段，紫杉醇是临床常用的化疗药物之一，在放疗的同时使用紫杉醇进行化疗，可以改善鼻咽癌患者的远期生存率，可见化疗是鼻咽癌综合治疗的重要手段之一。然而，在化疗过程中出现的肿瘤耐药问题常常是引起治疗失败的主要原因，其耐药产生的分子机制十分复杂。本课题组前期发现FOLR1的表达与鼻咽癌紫杉醇耐药密切相关，随后研究发现FOLR1引起的鼻咽癌紫杉醇耐药表型与其叶酸转运功能无关。本文将以鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系为研究对象，应用RNA干扰技术干扰FOLR1基因的表达后，人类全基因组表达谱芯片筛选FOLR1干扰前后在鼻咽癌紫杉醇耐药细胞中的差异表达基因，结果发现EGR1基因在两个鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系中均表达下调且下调倍数最高，接着应用免疫共沉淀技术验证FOLR1与EGR1在鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系中存在蛋白质交互作用，然后通过干扰和过表达EGR1基因，再用不同浓度的紫杉醇刺激，分别应用MTT法和平板集落形成实验检测其对紫杉醇敏感性的变化，结果发现干扰EGR1基因的表达后细胞对紫杉醇敏感性增加，而将EGR1基因过表达后细胞对紫杉醇的敏感性降低，提示EGR1可能是通过与FOLR1的交互作用，诱导和调节下游与肿瘤细胞生长或凋亡相关的信号分子而参与了鼻咽癌紫杉醇耐药，EGR1可能是鼻咽癌紫杉醇耐药逆转的理想靶点。同时利用对鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系（CNE-1/Taxol、HNE-2/Taxol）的 miRNA 芯片分析，获得表达下调明显的 miRNAs 的相关信息，验证当上调其表达时能对紫杉醇耐药有抑制作用。其中，hsa-miR-31-3p可能通过调节靶基因从而影响鼻咽癌细胞化疗耐药性，为逆转鼻咽癌细胞紫杉醇耐药的靶基因治疗提供信息。