在申请者前期工作的基础上,拟对鲫鱼PKR-like(CaPKR-like) Zα溶液结构及其与Z-DNA结合的分子机理进行深入分析。首先利用凝血酶切除PZα融合蛋白的His标签,过阳离子交换柱获得ZαPKR-like蛋白。同时,合成、构建含d(CG)n或r(CG)n等反向重复序列的DNA分子,用于模拟体外Z-DNA或Z-RNA。解析15N/15N,13C-标记ZαPKR-like核磁共振图谱,揭示其结构。解析15N-单标ZαPKR-like与Z-DNA结合图谱,分析与Z-DNA结合氨基酸的化学位移变化情况。点突变技术确定关键氨基酸。圆二色谱获得ZαPKR-like与Z-DNA结合的化学计量关系。表面等离子共振技术获得ZαPKR-like与Z-DNA结合常数。最终揭示鱼类Zα结合Z-DNA的分子机理,从而为了解PKR-like(PKZ)的功能及其在鱼类干扰素系统中的地位提供重要的理论依据。
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数据更新时间:2023-05-31
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