从TLR-NF-κB 信号通路探讨复方生地合剂调控Thl7细胞/Treg细胞平衡治疗SLE的机制

Systemic lupus erythematosus (SLE) is characterized by multiple organ involvement and the complex mechanisms of autoimmune diseases. A number of studies suggest TLR - the NF-kappa B signaling pathways induced initial T cells to the regulatory T cells (Treg cells) and Th17 cell differentiation, its balance disorders in morbidity. Our previous studies showed that compound radix rehmanniae mixture can adjust the correlation of the downstream of SLE patients with immune cytokine, and then improve the T lymphocyte balance play a role, but mechanism has not been fully elucidated. To infer: compound radix rehmanniae mixture by intervening in the TLR upstream of the immune response - the NF-kappa B downstream signaling pathways that regulate immune response Thl7 cells/balance of Treg cells to treat SLE, embodies the advantages of traditional Chinese medicine balance Yin and Yang and enlarge. Studied in this paper from the level of the overall level of animal and in vitro to investigate the compound radix rehmanniae mixture of TLR - the NF-kappa B signaling pathway and the influence of Thl7 cells/Treg cells balance adjustment, parse the compound radix rehmanniae mixture of SLE key molecular and cellular immune response of upstream and downstream of the regulatory mechanism, clear targets and the way, to seek for the high benefit low risk of SLE provide basis for treatment, as the complex mechanisms of TCM intervention refractory disease research ideas.

系统性红斑狼疮（SLE）是以多脏器受累为特征且具复杂机制的自身免疫性疾病。多项研究提示TLR-NF-κB信号途径诱导初始T细胞向调节性T细胞(Treg细胞)和Th17细胞分化, 致其平衡失调参与发病。我们的既往研究表明复方生地合剂可以调节SLE患者免疫下游的相关性细胞因子，进而改善T淋巴细胞平衡发挥作用，然机制尚未完全阐明。据此推测：复方生地合剂通过干预免疫应答上游的TLR-NF-κB 信号通路从而调节免疫应答下游的Thl7细胞/Treg细胞平衡来治疗SLE，体现中医中药平衡阴阳、标本兼治的优势。本研究拟从整体动物水平和体外水平探讨复方生地合剂对TLR-NF-κB信号通路的影响及Thl7细胞/Treg细胞平衡的调节，解析复方生地合剂对SLE免疫应答上游和下游的关键分子和细胞的调控机制，阐明作用靶点及途径，为寻求高效益低风险的SLE治疗方案提供依据，为中医药干预难治病复杂机制的研究开拓思路。

为探讨复方生地合剂对MRL/lpr小鼠的作用机制，从MRL/lpr小鼠TLR-NF-κB信号通路和体内外Th17细胞/Treg细胞平衡观察复方生地合剂对相关的细胞、基因、蛋白和细胞因子的影响。结果：1.中药组脾组织TLR7mRNA、TLR9mRNA、MyD88mRNA、NF-κBmRNA和RORγtmRNA的表达水平都低于模型组（P<0.05）。西药组的脾组织TLR7mRNA、TLR9mRNA、MyD88mRNA、和NF-κBmRNA的表达水平都低于模型组（P<0.01），RORγtmRNA的表达水平低于模型组（P<0.05），Foxp3mRNA的表达水平高于模型组（P<0.05）。2. 中药组的TNF-α、IFN-α、IL-17A水平均低于模型组（P<0.05），TGF-β1水平高于模型组（P<0.05）。西药组的IFN-α、IL-17A水平均低于模型组（P<0.05，P<0.01），TGF-β1水平高于模型组（P<0.05）。3. 中药组和西药组的Th17细胞/CD4+T细胞比例低于模型组（P<0.05， P<0.01），Treg细胞/CD4+T细胞比例高于模型组（P<0.05），Th17细胞/Treg细胞比例都明显低于模型组（P<0.01）。4. 中药组脾组织的TLR7、MyD88和NF-κB p65的蛋白表达水平都低于模型组的mRNA和蛋白表达水平（P<0.01）。5.体外经中药干预后，小鼠脾脏Th17细胞比例显著下降（P<0.01），小鼠脾脏单核细胞RORγt mRNA表达量显著下降（P<0.01），IL-17含量显著降低（P<0.01）。6.体外经中药干预后，小鼠脾脏Treg细胞比例显著上升（P<0.01），TGF-β含量显著升高（P<0.01）。复方生地合剂可能通过抑制MRL/lpr小鼠TLR-NF-κB通路信号传导调节Th17/Treg细胞平衡，为其治疗SLE以及推广应用提供实验依据。