裂谷热病毒的中和抗体筛选与中和机制研究

Rift Valley fever (RVF) is a viral disease that can cause mild to severe symptoms in both human and animals. The infected person may show mild symptoms including fever, muscle pains and headaches or severe symptoms including loss of sight, meningitis, hemorrhage fever, and death. So far, there are no FDA-approved vaccines and antiviral drugs for human in clinical treatment. Therefore, development of effective vaccines and antiviral drugs is important for public health..In this study, we are going to obtain PBMCs (peripheral blood mononuclear cells) from RVFV patients in the rehabilitation stage, and screen the B cells recognized by RVFV glycoproteins. The sequence of antibody is achieved by PCR and the V region is cloned into expression vector. IgG is expressed in 293T cells and then measured the affinity to antigen by ELISA、BIAcore and OCTET. Moreover, the neutralizing antibodies will be screened via neutralization assay and further confirmed in animal model. Finally, we aim to get the structures of antigen-neutralizing antibody complexes. On one hand, it can provide the detailed information of epitopes of antigen, thereby paving way on the vaccine development. On the other hand, the complex structures afford valuable information for antibody modification, which will help to achieve higher affinity neutralizing antibodies.

裂谷热(RVF)是一种由裂谷热病毒（RVFV）引发的经蚊类或接触传播的急型病毒性人畜共患病。被感染的动物出现流产、死亡等症状，被感染的人出现发热、肌肉疼痛、头痛症状，严重者出现眼部疾病、脑膜炎、出血热，甚至死亡。目前尚没有被批准在临床给人使用的疫苗和抗病毒药物。因此，研发抗RVFV的药物和具有保护性的疫苗对保护公众健康非常重要。本项目以RVFV表面蛋白Gn和Gc为靶蛋白，从康复病人血液中钓取能够结合这两种蛋白的B细胞，通过特异性PCR获得抗体序列信息，克隆、表达抗体，用中和实验和动物保护实验筛选具有中和活性的抗体，并利用结构生物学手段获得抗原-抗体复合物结构，一方面获得抗原表位信息，为疫苗研发提供理论基础。另一方面，阐明中和机制并基于结构对抗体进行改造，获得更高亲和力的中和抗体，为治疗RVFV感染的抗体药物研发提供前期基础。

裂谷热病毒(RVFV)是一种蚊媒病原体，可在牲畜和人类中引起大量发病率和死亡率。迄今为止，还没有获得许可的人类疫苗或治疗方法。因此，研发抗RVFV的药物和具有保护性的疫苗对保护公众健康非常重要。本研究以RVFV表面蛋白Gn和Gc为靶蛋白，从康复病人血液中钓取能够结合这两种蛋白的B细胞，通过特异性PCR获得了9株具有中和活性的抗裂谷热病毒(RVFV)的人源中和抗体，其中8株靶向Gn的抗体对感染小鼠有保护效果，1株抗体识别Gc具有较弱的中和活性。解析了4种靶向Gn的抗体与抗原Gn的复合物结构，获得抗原表位信息和阐明了抗体的中和机制。本研究为抗RVFV感染提供了理论基础与药物储备。在研究流感样病毒神经氨酸酶的分子机制方面，比较了蟾蜍和鳗鱼来源的流感样病毒的神经氨酸酶与感染人的流感病毒的神经氨酸酶的异同，阐明了这两类流感样病毒的神经氨酸酶活性的分子机制及与抑制剂互作的模式。通过解析波本病毒（BRBV）的囊膜蛋白Gp融合后状态的结构，深入分析了第三类病毒融合蛋白的融合机制。本项目共发表6篇文章。