广西优势药源青蒿琥酯联合珍珠液治疗皮肤瘢痕的机制研究

皮肤瘢痕的形成常不同程度地影响患者的容貌和功能，而瘢痕的发生发展受到多种机制的调控，其中上皮细胞与间质成分的相互作用是重要的原因之一；青蒿琥酯与珍珠液对抑制瘢痕形成具有一定功效。本项目拟采用青蒿琥酯、珍珠水解液及二者联用加于体外共培养的上皮细胞、成纤维细胞，观察细胞增殖状况及迁移能力，RT-PCR、western-blot检测上皮间质交互作用因子1等，并局部外用于兔耳瘢痕模型观察瘢痕状况，每隔一定时间切取创伤部位组织及形成的瘢痕组织，检测瘢痕增生指数，组织学染色观察上皮细胞、成纤维细胞、肥大细胞、微血管密度、上皮间质交互作用因子1及血管内皮生长因子等的表达，原位杂交及Western-blot检测标本中上皮间质交互作用因子1、血管内皮生长因子等的表达情况，探讨青蒿琥酯联合珍珠水解液影响创伤愈合及瘢痕形成的机制，为防治皮肤瘢痕提供新思路。

皮肤病理性瘢痕是临床上常见的皮肤纤维化疾病，目前临床上对于瘢痕的治疗方法众多，但均未能得到满意的疗效。本实验通过体外培养增生性瘢痕成纤维细胞，采用青蒿琥酯、珍珠水解液单剂及两者联合作用瘢痕成纤维细胞，MTT法、流式细胞术检测各组处理对细胞增殖和凋亡的影响；荧光定量RT-PCR、Western blot法检测各因子的mRNA及其蛋白的表达，从而探讨复方药物中两活性成分联合应用对病理性瘢痕的作用及机制。构建兔耳增生性瘢痕模型，使用不同配比的青蒿琥酯、珍珠水解液及两者复合的自制外用膏剂行瘢痕局部涂抹治疗，治疗第28天后收获兔耳瘢痕，HE、VG染色后行形态及计量观察；免疫组化及免疫印迹法检测兔耳瘢痕组织中各相关因子的蛋白的表达。裸鼠皮下埋植法建立裸鼠荷人皮肤瘢痕模型，21天后青蒿琥酯行瘢痕内注射, 观察治疗效果。结果显示：青蒿琥酯可诱导瘢痕成纤维细胞凋亡，对兔耳瘢痕的增生有抑制作用，其联合珍珠水解液在体内外均可抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成，两者联合使用有协同效应。其机制可能是通过下调转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、果蝇抗皮肤生长因子原体（Smad3）等促纤维化因子，同时上调γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-1β（IL-1β）及基质金属蛋白酶-1（MMP1）等抑制纤维化相关因子，同时下调上皮-间质交互作用因子1（EPSTI1）的表达从而抑制上皮间质间的相互作用，并抑制瘢痕的血管增生，从而发挥抗皮肤增生性瘢痕的作用。本研究通过兔耳瘢痕模型筛选出了青蒿琥酯、珍珠水解液在外用膏剂中的适宜药物配比和浓度。此外，还通过皮下埋植法建立了裸鼠荷人瘢痕模型，发现青蒿琥酯瘢痕内注射亦可抑制该模型瘢痕的生长，其量效关系及机制值得进一步探讨。采用水蛭素进行了类似的药效和药理学实验，发现其亦有较好的治疗效果，其机制值得进一步研究。