糖皮质激素受体在膀胱癌进展中的作用及其机制研究

Bladder cancer is the most common urinary malignant tumor with rising incidence . The prognosis is really poor for patients with invasive bladder cancer; even they are received treatment combined with surgical operation, chemotherapy and radiotherapy. Activation of glucocorticoid receptor (GR) can lead to growth arrest and apoptosis in tumors. Our previous study found that the positivity of GR expression in bladder cancer is 100%. The expression level of GR was related to grade, stage, and prognosis. Preliminary in vitro study showed that the glucocorticoid could inhibit the growth of bladder cancer cell. Our proposal is to analyze 120 clinical specimens of bladder cancer, study the relationship between GR expression and tumor grade, stage, metastasis, and prognosis. GR negative cell lines will be established by using lentiviri burdening GR-shRNA. We will compare cell growth, apoptosis, morphology, invasion and angiogenesis between parental cells and GR knock-down cells, under different invention, and the molecular mechanisms will be investigated. SCID mice tumor-bearing model will be brought out to observe the effect of dexamethasone on tumorigenesis, invasion and metastasis in different cell clones. Serum cortisol concentration will be evaluated in patients of bladder cancer and healthy adults. Analysis will be given out to explain the relationship of serum cortisol level with development, grade, stage, and prognosis of bladder cancer.

膀胱癌是最常见的泌尿系统恶性肿瘤，并且其发病仍呈逐年上升趋势。浸润性膀胱癌，手术联合常规放、化疗预后不佳，有探索新治疗方法的临床需要。糖皮质激素受体(GR)活化可导致多种肿瘤细胞生长停滞并诱导凋亡。我们前期研究发现糖皮质激素受体在膀胱癌100%表达，其表达水平与肿瘤恶性程度、预后相关。体外实验初期结果表明糖皮质激素作用可导致膀胱癌细胞生长减缓。本研究拟通过对临床标本检测，了解膀胱癌中GR的表达及其与肿瘤分级、分期、转移、预后的相关性。利用shRNA基因封闭技术研究GR低表达膀胱癌细胞株与其父系GR高表达膀胱癌细胞株之间体外培养条件下生长、侵袭能力的变化与分子机制。建立SCID小鼠荷瘤模型，观察不同克隆细胞药物作用下成瘤和侵袭、转移情况。测定临床正常对照与膀胱癌患者血液标本中血皮质醇浓度，分析血皮质醇水平与膀胱癌发病、临床分级、分期和预后的相关性。

对于进展期膀胱癌患者，糖皮质激素常被用于减轻急性毒性反应，特别是化疗导致的剧烈呕吐，及恶病质的改善。然而，对于糖皮质激素是否通过糖皮质激素受体通路直接影响膀胱癌的的转移和侵袭，目前尚不明确。.首先，我们在人膀胱癌细胞株和组织芯片中研究糖皮质激素受体的表达。然后，在膀胱癌细胞株中观察地塞米松对糖皮质激素受体转录、细胞增殖、凋亡、细胞周期和侵袭能力的影响。最后，运用小鼠的膀胱癌荷瘤模型来评估地塞米松对肿瘤进展的疗效。对上述所有细胞系和组织检查发现，糖皮质激素受体表达均为阳性。无论是否应用顺铂，地塞米松均增加糖皮质激素受体介导的受体活性及细胞增殖，并抑制凋亡。与此相反，地塞米松抑制细胞侵袭，及其相关基因[MMP-2、MMP-9的表达，白细胞介素（IL）6，血管内皮生长因子]的表达，抑制MMP-2、MMP-9的活性，及诱导间质向上皮转换。此外，地塞米松可调高IκBα蛋白水平，并使细胞胞浆累积NF-κB。在荷瘤小鼠，地塞米松促使所种植的肿瘤稍稍生长，但完全阻止了血性腹水的进展，实际上提示了其可阻止肿瘤细胞的腹膜转移。在上述所有实验中，均通过糖皮质激素受体拮抗剂或糖皮质激素受体基因敲除，来实现地塞米松无作用 的对照组条件。因此，糖皮质激素受体激活，通过抑制凋亡而促进肿瘤细胞增殖，并抑制其侵袭和转移。这些结果可能为尿路上皮癌的化疗方案的发展和改进提供依据，如加用或不用糖皮质激素受体激动剂/拮抗剂。.我们的研究表明，糖皮质激素受体（GR）信号通路激活抑制膀胱癌细胞的侵袭和转移，却通过抑制顺铂诱导的细胞凋亡，而增加肿瘤细胞增殖。因此，对膀胱癌患者化疗时联用地塞米松可能导致不利的结果，如耐药。我们试图寻找一种糖皮质激素，它对肿瘤细胞的侵袭具抑制作用，但不会刺激肿瘤细胞增殖。通过文献检索，发现一种植物提取物Compound A具有选择性激活GR的作用 ，在前列腺癌中已经得到证实。我们在膀胱癌中进行了细胞增殖、侵袭实验和受体功能分析,发现Compound A主要通过选择性调节GR活性，显著抑制膀胱癌细胞的增殖与侵袭，抗肿瘤效果优于传统的糖皮质激素。