乙肝恶性转化中病毒变异驱动的炎症动态调控网络和关键节点

乙肝病毒变异是恶性转化过程中的标志性事件，研究参与病毒变异选择和受病毒变异驱动的炎症网络调控规律有助于阐明乙肝恶性转化的分子机制。本课题首先研究病毒变异种类和频率对应的无症状携带者、慢性乙肝、肝硬化和肝细胞癌患者外周血淋巴细胞和肿瘤浸润淋巴细胞的基因表达谱和miRNA表达谱，构建选择病毒变异的炎症调控网络，研究网络标志动态变化；用病毒变异基因转染人肝细胞，研究基因表达谱和miRNA表达谱，发现受病毒变异驱动的调控网络和网络标志；以两种网络标志为种子基因，探索正常肝组织、癌旁肝组织和肝癌表达谱中与种子基因相互作用的基因，构建功能亚网络，发现与炎症恶性转化和恶性表型相关亚网络及关键节点分子。用转座子系统在体内外验证关键节点分子联合病毒变异基因的致肝癌作用；用前瞻性研究验证节点分子对肝癌及其预后的预测价值。该研究为揭示乙肝恶性转化的炎症调控网络，探索肝癌筛查和预后分子标志和治疗靶点奠定基础。

乙肝病毒（HBV）变异是炎-癌恶性转化过程中的标志性事件。本研究旨在明确参与病毒变异选择的炎症调控网络以及受病毒变异驱动的肝细胞调控网络，以两种网络的关键节点分子构建功能亚网络。利用动物模型和队列研究分别验证节点分子的致癌作用和对肝癌发生及预后的预测价值。.根据高危HBV突变和疾病状态对HBV慢性感染者进行分类，分别进行了cDNA和miRNA的表达谱分析。以HBV致癌队列对节点分子和功能亚网络影响下HBV变异选择的动态变化进行了验证。构建高危HBV变异基因序列转染的肝及肝癌细胞系，进行cDNA和miRNA表达谱分析，明确了HBV突变驱动的肝细胞炎症网络。利用HCC患者的癌和癌旁组织进行了RNA-Seq，验证了功能网络和节点分子对恶性表型的作用。构建了HBV高危突变致癌的小鼠模型，验证了LS区和X区高危突变可以显著促进HCC的发生。利用该动物模型，明确了参与HBV变异选择的炎症网络和HBV变异驱动的肝细胞炎症网络的相互作用。利用HCC进化中晚期患者的癌与癌旁组织进行了HBV捕获测序，研究了HBV整合这一调节肝细胞信号网络的重要机制。发现早期复发患者癌旁组织的病毒整合事件显著多于2年后复发和未复发患者，支持了“癌症进化发育学”中癌旁组织处于癌症进化中期的科学论断。通过HBV母婴传播队列，我们发现从慢性感染形成的早期开始，致癌性HBV变异即为炎症微环境所逐渐选择出来。发现炎症信号网络上关键分子的遗传多态性可以增加HCC风险。通过慢性HBV感染者队列，我们发现炎症指标和HBV变异组合能够增加预测HBV-HCC发生的可靠性，发现抗病毒治疗可显著降低含A1762T/G1764A或C1653T的变异型HBV的致癌作用，但不能降低T1753V的致癌作用；HBV-HCC术后队列研究显示，抗病毒治疗降低HCC复发风险，而对于癌旁肝组织中存在3'端截短型HBx整合者，抗病毒治疗不能预防HCC复发。.本项目从多水平、多角度挖掘了乙肝恶性转化过程中HBV变异相关的信号调控网络及其节点分子，并对其功能和应用价值进行了验证。为进一步明确乙肝恶性转化机制，探索肝癌筛查标志与靶向治疗靶点奠定了基础。