MFHAS1通过ERK信号转导通路对脓毒症小鼠T淋巴细胞的作用及机制的研究

Sepsis is one of the common critical illnesses with high mortality on clinic. Malignant fibrous histiocytoma amplified sequence 1 (MFHAS1) is an important one in ROCO family proteins. Our previous study found, which may be involved in TLR4 signalling pathway, MFHAS1 plays a negative regulatory role in the inflammatory response. In addition, we investigated it can also produce T lymphocytes proliferation during the late sepsis. But the specific mechanisms and immune effect caused by MFHAS1 has not been studied. Recently, people found that it can activate the Ras \ Raf \ MEK \ ERK signalling pathway, which is vital to cell proliferation, differentiation and apoptosis. Hence, we will exam the functional change of T lymphocytes in mice during sepsis through the affection of MFHAS1 acting on ERK signalling pathway by the molecular biology techniques, such as gene transfection, coimmunoprecipitation as well as flow cytometry and explore the mechanism of MFHAS1 to adaptive immune system, which will provide the theoretical support to immunomodulatory treatment of sepsis, especially in T lymphocytes.

脓毒症是临床上常见的危重病之一，病死率较高。恶性纤维性组织细胞瘤扩增顺序1（Malignant Fibrous Histiocytoma amplified sequence 1，MFHAS1）是ROCO蛋白家族的重要一员。我们前期研究发现，其可参与TLR4信号转导通路，对炎症反应起负调控作用。进一步研究发现它还可对脓毒症后期的T淋巴细胞产生增殖作用。但确切作用机制和产生的免疫效应尚未清楚。最近研究表明它可以激活CD34+细胞的Ras\Raf\MEK\ERK信号通路，对细胞的增殖、分化和凋亡起调节作用。本课题通过基因转染、免疫共沉淀、流式细胞仪等分子生物学技术，进一步验证MFHAS1介导ERK信号转导通路的方式和部位，探讨MFHAS1对T淋巴细胞的分化和功能变化的影响，并阐明MFHAS1在脓毒血症后期对适应性免疫系统作用机理，为脓毒血症后期免疫功能调控提供新的思路。

脓毒症是由宿主对感染反应失控引起的威胁生命的器官功能障碍。脓毒症和脓毒性休克每年影响世界范围内数百万人的健康，国内外的死亡率均高达25%。引起脓毒症器官功能损伤的主要原因是失调的炎症反应细胞及其过度分泌的炎症因子，因此，对于炎性细胞的调控一直是脓毒症研究的重点。我们的前期研究显示：恶性纤维性组织细胞瘤扩增序列1（Malignant fibrous histiocytoma amplified sequence 1, MFHAS1）具有潜在的免疫调节作用，能通过TLR信号通路调控炎性反应。本课题第一部分对MFHAS1在脓毒症患者血清和外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）中的表达水平进行了检测，发现脓毒症患者血清MFHAS1水平较非脓毒症患者显著升高，且脓毒症患者PBMC中的MFHAS1 mRNA表达水平也显著高于非脓毒症患者。本课题第二部分对MFHAS1是否能调控TLR2进行了研究，首次发现MFHAS1对TLR2具有双相调节作用：先抑制（TLR2下游转录因子NF-κB、AP-1的转录活性和炎症因子IL-6、TNF-α的产生下降）后刺激（TLR2下游转录因子和炎症因子的产生增加）。MFHAS1还能通过促进JNK和p38磷酸化，激活JNK和p38。本课题第三部分通过流式细胞仪检测巨噬细胞表面标志物Ly6C的表达情况，并通过qPCR检测编码M1和M2巨噬细胞表面标志物IL-6、Arg-1、IL-10等mRNA水平。结果发现MFHAS1泛素化使得巨噬细胞表面Ly6C表达较对照组上调，M1标志物表达上调，而M2标志物下调。综上所述，通过本项目的研究我们发现MFHAS1在脓毒症患者血清和PBMC中表达增加，且MFHAS1能通过对TLR2信号通路的调控，调节巨噬细胞M1极化和M2转化，从而调节炎性反应。这些研究结果使得MFHAS1可以成为脓毒症诊断与治疗的一个新靶点。