大叶蛇葡萄降压药效物质的作用机制及蛋白表达研究

大叶蛇葡萄（Ampelopsis megalophylla）为湖北西部地区民族药霉茶的原植物，具有清热凉血的功效，临床用于高血压、头昏目胀等症，疗效显著。本申请项目针对目前大叶蛇葡萄降血压药效物质及其作用机制不明确、资源品质及药材质量缺乏控制等关键问题，拟在前期研究基础上，在药理活性跟踪下进一步确定其降血压有效物质部位和活性次生代谢产物，并研究主要药效物质对RAS和血管内皮分泌功能的调节以及对靶器官肾脏的保护，探讨其作用机制；对该药用植物进行资源调查，研究影响其资源品质的关键生态环境因子, 并应用蛋白组学技术2D-PAGE寻找该药用植物主要活性次生代谢产物的关键蛋白表达，揭示其活性成分形成的分子生物学基础，以期提高其资源品质；采用HPLC、HPCE等现代分析技术，制定大叶蛇葡萄药材的质量标准和指纹图谱，构建其质量评价体系。综合上述预期研究成果，可望为该药用植物资源的深度开发利用奠定基础。

大叶蛇葡萄Ampelopsis megalophylla为湖北西部地区常用中草药，具有清热凉血功效，临床用于高血压、头昏目胀等症，疗效显著。本项目针对目前其降压药效物质及其作用机制不明确、资源品质及药材质量缺乏控制等关键问题开展研究。以2K1C-RHR为药理模型，筛选其降压活性物质；结果提示其乙醇提取物、乙酸乙酯部位为有效部位；蛇葡萄素、杨梅素、杨梅苷为活性成分。并以SHR为药理模型，筛选其降压活性物质；结果提示其总黄酮提取物及蛇葡萄素具有明显降低SHR的SBP作用。此外，总黄酮提取物及蛇葡萄素具有降低SHR血浆中AngⅡ、ET含量的趋势，但不明显(P>0.05)。Ucr、BUN及Ccr等生化指标与病理切片结果提示高血压造成了SHR肾脏的功能性损害，总黄酮提取物中、低剂量组对肾脏有一定的保护作用；生化指标提示蛇葡萄素组对肾脏有一定的保护作用趋势，但从组织切片上看无明显改善。血清药物化学研究确定含量较高的蛇葡萄素为入血主要成分。资源品质的关键生态环境因子研究结果提示其适宜的气候及生态环境为年平均温度10℃～17℃、年平均降水量900mm～1500mm、年平均日照时数1000h～1700h环境较适合其生长；该植物喜阴，多生长于海拔600m～1800m的山坡、河谷、瀑布附近等较潮湿的灌木丛中，土壤为水分含量较高的黄棕或红棕壤；其对土壤中营养元素的需求是N元素对其生长发育影响较大，其次是P元素，再次是B元素。资源品质研究提示湖北省来凤县为大叶蛇葡萄优质资源生态产区，活性成分蛇葡萄素、杨梅苷含量较高。采用蛋白组学2D-PAGE及质谱技术，根据各个样品间蛇葡萄素含量差异与蛋白点灰度值的比值差异的相关性选取差异较大的蛋白质点22个进行质谱鉴定，其中鉴定了flavanone 3-hydroxylase等15个差异蛋白，flavanone 3-hydroxylase等参与了植物细胞中黄酮类化合物生物合成过程和氧化-还原过程。参照《中国药典》技术要求，制定了其药材完善的质量标准，包括蛇葡萄素、杨梅素及杨梅苷的TLC定性鉴别和HPLC含量测定，水分、灰分、重金属及砷盐检查等内容；参照相关技术要求，制定了其药材规范的HPLC指纹图谱，标定指纹峰12个，确定指纹图谱中的6号峰为蛇葡萄素，9号峰为杨梅苷，10号峰为槲皮苷，11号峰为杨梅素。以上研究成果可望为该药用资源的品质提高和利用奠定基础。