刺五加有效组分对转染α-Syn的 SH-SY5Y细胞调控及机制研究

前期研究已确定刺五加治疗帕金森病（PD）的有效组分及其初步药效机制。本课题将采用基因转染技术，以慢病毒为载体，构建人野生型和A53T突变型α-突触核蛋白（α-Syn）的病毒转染系统，转染人神经母细胞瘤细胞株（SH-SY5Y），同时以鱼藤酮为体外毒素，致SH-SY5Y细胞的损伤，建立稳定表达的PD细胞模型。应用流式细胞术、RT-PCR和Western blotting等技术手段，从影响细胞凋亡、信号转导通路、蛋白酶体途径、PD相关蛋白等角度，研究刺五加有效组分对未转染和转染α-Syn的SH-SY5Y细胞的调控作用及其内在机制。另外本课题研究将引入蛋白质组学方法，从整体上定性和定量检测刺五加有效组分处理后细胞内蛋白质分子的变化，对在蛋白质水平探讨药物作用机制及寻找新药靶点有重要意义。本研究将为刺五加开发为作用靶标明确、拥有自主知识产权、安全有效的治疗帕金森病的中药新药奠定基础。

本研究在前期研究工作的基础上，采用基因转染技术，以慢病毒为载体，构建人野生型和 A53T 突变型α-突触核蛋白（α-Syn）的病毒转染系统，转染人神经母细胞瘤细胞株（SH-SY5Y），建立稳定转染的PD细胞模型。应用流式细胞术、RT-PCR和 Western blotting 等技术手段，从影响细胞凋亡、胰岛素信号通路、PD 相关蛋白等角度，研究了刺五加有效组分对未转染和转染α-Syn 的SH-SY5细胞的调控作用及其作用机制。另外本课题研究引入蛋白质组学方法，定性和定量地检测了刺五加有效组分处理后细胞内蛋白质分子的变化，找出了野生型和 A53T 突变型α-Syn转染后，细胞中差异表达的蛋白，并以它们为潜在生物标志物来探讨刺五加有效组分对这两个模型干预作用，对在蛋白质水平探讨药物作用机制及寻找新药靶点有重要意义。