MicroRNA-181a对乳腺癌细胞BCRP表达与功能的调控机制

BCRP与乳腺癌耐药性密切相关。BCRPmRNA-3'UTR远长于一般基因，可能成为miRNA作用靶点。申请者通过miRNA芯片首次分析BCRP高表达乳腺癌组织的miRNAs表达谱并通过RT-PCR验证，发现miR-181a表达明显下调；理论预测BCRPmRNA-3'UTR与miR-181a有关键结合位点，提示miR-181a可能调控BCRP介导的乳腺癌细胞耐药性。但作用方式与调控机制如何？均未见报道。本项目拟通过①Luc和GFP报告基因表达分析，研究miR-181a与BCRP的直接作用和结合位点；②在不同药物敏感性乳腺癌细胞进行miR-181a沉默与过表达干预，研究miR-181a转录后调控BCRP作用；③检测BCRP表达与功能及细胞生长表型与相关因子变化，探讨miR-181a调控BCRP介导的乳腺癌细胞耐药性机制。本项目为研究与发现调控乳腺癌耐药相关的新基因靶点提供理论和实验依据。

BCRP是介导乳腺癌MDR的重要耐药蛋白，因此发现靶向作用BCRP的小分子物质对于逆转乳腺癌MDR具有重大意义。本研究拟探讨miR-181a对乳腺癌BCRP表达及其介导耐药性的靶向调控作用。首先通过miRNA芯片，分析不同BCRP表达水平乳腺癌细胞中miRNAs差异表达，发现相对于BCRP低表达的乳腺癌MCF-7细胞，BCRP高表达的乳腺癌MCF-7/MX细胞中有17个miRNA高表达；16个miRNA低表达，其中miR-181a表达下调最显著；通过qRT-PCR亦发现miR-181a在BCRP高表达的乳腺癌耐药细胞MCF-7/MX中明显低于乳腺癌敏感细胞MCF-7；荧光素酶报告基因分析证实miR-181a可与BCRPmRNA-3'UTR结合；诱导乳腺癌耐药细胞MCF-7/MX中miR-181a过表达后可下调BCRP表达，增加耐药细胞对MX敏感性；采用乳腺癌耐药细胞MCF-7/MX构建裸鼠移植瘤，miR-181a agmir瘤内注射转染诱导miR-181a高表达可抑制瘤组织BCRP表达，增加MX抗肿瘤作用；进一步用乳腺癌敏感细胞MCF-7对上述结果进行反向验证，发现抑制miR-181a表达可上调BCRP在MCF-7细胞中的表达及降低对MX的敏感性。综上，miR-181a能够通过与BCRP的mRNA-3’UTR相互作用调控乳腺癌BCRP表达及其介导的对MX耐药作用，有望成为逆转乳腺癌MDR的新靶点。