环状RNA CIRC-ADAM9靶向mir-133b介导内皮祖细胞调控动脉粥样硬化内皮损伤修复的作用及机制研究

Circular RNA is involved in the post-transcription of microRNA on the target gene as a competitive endogenous RNA, but there was no reports of its effects on endothelial injury repair. Our findings suggest that: (1) the expression of CIRC-ADAM9 in peripheral blood of patients with coronary heart disease is decreased while the expression of mir-133b is increased. (2) The expression of mir-133b is decreased and the apoptosis of EPCs is decreased by overexpression of CIRC-ADAM9. The hypothesis that CIRC-ADAM9 inhibits the binding of mir-133b to sirt1 mRNA 3'UTR by competing with mir-133b, regulates the expression of sirt1 protein, and mediates EPCs to the repair of endothelial injury in AS. This topic will be clarified both in vitro and in vivo: CIRC-ADAM9 promotes the recruitment of EPCs in the aorta of ApoE - / - mice by regulating mir-133b/sirt1 axis, reverse the impairment induced by hypoxia and ox-LDL. This study clarified that CIRC-ADAM9, mir-133b and sirt1 mediate the functions of EPCs in the regulation of AS endothelial injury and provide a new idea for the prevention and treatment of AS.

环状RNA作为竞争性内源RNA，参与miRNA对靶基因的转录后调控，但它在AS内皮损伤修复尚无相关报道。我们前期研究发现：①冠心病患者外周血EPCs中CIRC-ADAM9表达下降，mir-133b表达上升；②过表达CIRC-ADAM9引起mir-133b表达下降，EPCs凋亡减少。由此提出假说，CIRC-ADAM9与mir-133b相互竞争，抑制mir-133b与sirt1 mRNA 3’UTR结合，调控sirt1蛋白表达，进而介导EPCs调控AS内皮损伤的修复。本课题拟从体外和体内两个层面明确：CIRC-ADAM9通过调节mir-133b/sirt1轴，逆转低氧和ox-LDL所致的EPCs功能损伤，促进ApoE-/-小鼠主动脉EPCs的募集，减缓AS进程。本研究阐明CIRC-ADAM9、mir-133b、sirt1三者介导EPCs调控AS内皮损伤修复的分子机制，为AS的防治提供新的思路。

内皮祖细胞（EPCs）功能障碍是糖尿病血管并发症的关键因素。尽管已经深入研究了 microRNA 和环状 RNA 在调节细胞功能中的作用，但它们的在调节 EPC 自噬和凋亡中的作用仍有待阐明。本研究调查了mir-20a-5p 及其预测的靶标 circ-ADAM9 在用高糖 (30 mM) 处理的 EPC 和糖尿病小鼠后肢体缺血模型。发现mir-20a-5p抑制高浓度葡萄糖诱导的EPCs自噬和凋亡。此外，mir-20a-5p 可以抑制 EPCs 中 PTEN 和 ATG7 的表达，促进AKT 和 mTOR 蛋白在高糖条件下的磷酸化。研究的潜在机制揭示 circ-ADAM9 作为 mir-20a-5p 的 miRNA 海绵，促进了高浓度葡萄糖。 Circ-ADAM9 与 mir-20a-5p 相互作用上调 PTEN 和 ATG7，并抑制AKT 和 mTOR 的磷酸化加剧了 EPC 在高糖条件下的自噬和凋亡。此外，circ-ADAM9 的沉默增加了糖尿病小鼠后肢微血管的形成。我们的发现揭示了一个由 mir-20a-5p、circ-ADAM9、PTEN 和 ATG7 组成的新型自噬/凋亡调节通路。 Circ ADAM9 是调节糖尿病 EPC 和血管生成功能的潜在新靶点。