Cideb在动脉粥样硬化泡沫细胞形成过程中的作用及机制研究

泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）斑块发生的核心环节之一，脂滴相关蛋白在泡沫细胞形成和脂滴代谢过程中具有重要作用，对其功能和机制的研究正受到关注。我们前期的研究显示，Cideb是一种脂滴相关蛋白，能够影响细胞内脂滴的形成，在AS斑块和THP-1（人单核细胞淋巴瘤）来源泡沫细胞中的表达水平明显升高，但其功能和分子机制尚不明确。本项目拟通过收集人AS标本，采用组织学方法研究Cideb与AS之间关系；再利用已建立的ApoE和Cideb双基因敲除小鼠模型，确定Cideb在AS发生过程中的作用；然后，采用Cideb沉默或敲除的细胞模型，研究Cideb对泡沫细胞形成过程的影响；最后，利用免疫共沉淀、显性负突变体等方法，确定Cideb在泡沫细胞形成过程中的相互作用分子及作用机制，期望阐明Cideb在泡沫细胞形成中的作用及机制，为从泡沫细胞形成方面防治AS提供研究基础。

本研究通过对动脉粥样硬化斑块的组织学研究，ApoE-/-小鼠动物模型的研究，Cideb沉默或敲除细胞模型的研究，以及Cideb相互作用分子的研究，探讨Cideb 在动脉粥样硬化泡沫细胞形成过程中的作用及其机制，结果将为动脉粥样硬化的病因学研究提供一定的思路，同时也为通过抑制泡沫细胞形成，进行动脉粥样硬化的防治提供研究基础。本研究主要获得以下成果：.1、Cideb作为一种脂滴蛋白影响泡沫细胞形成过程中脂滴的形成，包括脂滴的合成、转运、融合、分解等。.2、收集人动脉粥样硬化斑块标本，确定了Cideb在人动脉粥样硬化斑块中高水平表达；构建了Cideb siRNA和逆转录病毒；利用动脉粥样硬化模型小鼠，确定Cideb对动脉粥样硬化发生的影响；建立Cideb基因沉默泡沫细胞模型，确定Cideb在动脉粥样硬化泡沫细胞形成过程中的作用。.3、利用两种细胞模型：（1）Cideb 沉默的THP-1细胞（人单核细胞淋巴瘤细胞系）；（2） Cideb 基因敲除小鼠的腹腔巨噬细胞和（或）外周血单个核细胞（PBMC）。采用小鼠腹腔来源的巨噬细胞，进行形态学研究，以及对重要结果的验证。对于THP-1 源性泡沫细胞，我们发现Cideb表达水平升高。一方面采用基因芯片（Microarray）分析泡沫细胞的形成过程中Cideb相关基因表达水平的变化；另一方面研究所形成的泡沫细胞在脂肪代谢方面的生理学差异，包括脂肪酸的摄取和胆固醇的外流速度，检测Cideb相关蛋白及调节蛋白在泡沫细胞形成过程中表达水平的改变。.4、在分子水平上，我们利用酵母双杂交和免疫共沉淀方法发现Cideb在泡沫细胞形成过程的相互作用蛋白为ApoB。进一步，我们证明了Cideb可以通过影响ApoB的降解速度，从而调控泡沫细胞中脂质的积累，在最大程度上阐明Cideb在动脉粥样硬化泡沫细胞形成过程中的作用机制。