针刺调节脑梗死大鼠脑动脉收缩蛋白运动的分子机制研究

本研究以线栓法复制脑梗死大鼠模型为研究对象，以脑表面血管（大脑中动脉、前动脉和后动脉）平滑肌细胞内收缩装置结构中收缩蛋白（肌球蛋白、肌动蛋白）运动为切入点，以调节收缩蛋白运动的Ca2＋下游细胞信号转导通路（即肌球蛋白轻链激酶MLCK途径）和蛋白激酶C（PKC）两条途径为主线，以两条途径中关键的信号转导调节蛋白MLCK、肌球蛋白轻链磷酸酶（MLCP）、肌球蛋白－ATP酶、PKC、肌钙样蛋白（CaD）和钙调结合蛋白（CaP）的表达和活性变化为指标，应用免疫组化、Western blot、γ32－P-ATP法和EnzCheck磷酸检测法等先进的技术和方法，动态观测脑梗死后上述指标的变化规律和针刺干预效应，探讨针刺人中穴调节脑血管平滑肌细胞收缩装置功能的胞内信号转导机制。最终揭示针刺调节脑血管平滑肌收缩运动，促进脑循环治疗脑梗死的分子机制，验证和丰富脑梗死侧枝循环发生发展的"脑表面血管枢纽学说"。

本课题通过研究脑梗死发生后脑动脉血管平滑肌细胞中与血管收缩运动相关的肌球蛋白轻链激酶（MLCK）及蛋白激酶C（PKC）信号转导通路关键的信号转导调节蛋白MLCK、肌球蛋白轻链磷酸酶（MLCP）、肌球蛋白——ATP酶、PKC、肌钙样蛋白（CAD）、钙调结合蛋白（CAP）的表达和活性变化规律以及针刺干预效应，探讨针刺人中穴调节脑血管平滑肌细胞收缩装置功能的胞内信号转导机制。.选用Wistar大鼠，随机分为正常组、假手术组、模型组和针刺组。采用Longa线栓法复制脑梗死大鼠模型，以脑表面血管（大脑前动脉、中动脉和后动脉）为研究对象，采用免疫组化和免疫印迹法检测动脉血管平滑肌细胞MLCK和PKC的蛋白表达；采用肌球蛋白轻链（MLC）磷酸化法检测动脉血管平滑肌细胞MLCK的活性；采用酶联免疫和磷酸化法检测PKC和肌球蛋白——ATP酶的活性；采用免疫印迹法检测肌球蛋白轻链磷酸酶（MLCP）及CAD、CAP的蛋白表达。.结果发现大鼠脑梗死后6h内：1．脑血管平滑肌MLCK蛋白表达水平及活性随梗死时间延长呈逐渐上升趋势；MLCP（MYPT1、PP1c-δ）蛋白表达水平呈逐渐下降趋势，针刺干预在不同时相内均可抑制MLCK蛋白表达水平和酶活性的上升以及MLCP蛋白表达水平的下降，且在梗死后3h内作用显著，具有一定的时效性 ；MLCP的 M20亚基蛋白表达水平未见显著变化。2.脑血管平滑肌肌球蛋白ATP酶活性活性随梗死时间延长呈逐渐上升趋势，针刺干预在不同时相内均可抑制其活性上升的趋势，且在梗死后3h内作用显著，具有一定的时效性。3. 脑血管平滑肌PKC蛋白表达水平及活性随梗死时间延长呈逐渐上升趋势；造模后CaP、CAD表达呈下降趋势；针刺干预可显著抑制MCAO模型大鼠血管平滑肌PKC蛋白及活性表达上升趋势，且在梗死后6h内作用显著；针刺可抑制MCAO模型大鼠血管CaP、CAD表达下降趋势，对维持血管张力、保证血管功能和形态正常具有重要作用。.综上针刺干预可通过调节MLCK及PKC信号转导通路关键的信号转导调节蛋白，抑制脑血管平滑肌细胞的收缩运动，促进平滑肌舒张，对缓解脑梗死后脑血管痉挛，改善脑供血，促进侧枝循环形成有一定的积极作用。.本课题培养博士研究生2名，发表文章5篇。