自噬在尿蛋白所致肾小管上皮细胞损伤中的作用

我们发现：来自肾病患者的尿蛋白呈剂量依赖性促肾小管上皮细胞（TECs）损伤，且与尿蛋白性质有关，下一步的研究是寻找控制尿蛋白所致TECs损伤的方法。自噬又称Ⅱ型程序性死亡，是真核生物常见的生命现象，它在肾病领域的研究刚刚起步。我们初步发现：持续大量蛋白尿肾炎患者TECs自噬现象显著较单纯血尿肾炎患者普遍。本项目拟在前期工作基础上，首先应用肾活检标本进行自噬标记蛋白免疫染色和电镜观察，以阐明TECs自噬强度与患者尿蛋白严重程度是否相关；继之在体外观察不同浓度以及不同性质肾炎患者尿蛋白对TECs自噬程度的影响，以进一步阐明自噬是否参与尿蛋白所致TECs损伤；最后，分别应用自噬诱导剂或抑制剂干预受尿蛋白刺激TECs和蛋白超负荷大鼠模型，观察增强或抑制自噬是否影响尿蛋白所致TECs凋亡和坏死，以探讨"自噬调控"能否作为防治尿蛋白所致TECs损伤的手段。本研究可望为难治性蛋白尿患者寻找新的治疗思路。

目前我们已经超前完成全部计划研究内容，首先应用肾活检标本进行自噬标记蛋白免疫荧光和电镜观察，以阐明肾小管上皮细胞（RTECs）自噬强度与患者尿蛋白严重程度是否相关；继之在体外观察不同浓度尿蛋白对RTECs 自噬强度的影响，以进一步阐明自噬是否参与尿蛋白所致的RTECs 损伤；最后，分别应用自噬诱导剂或抑制剂干预受尿蛋白刺激的RTECs 和尿蛋白超负荷大鼠模型，观察增强或抑制自噬是否影响尿蛋白所致RTECs 损伤和凋亡，以探讨“自噬调控”能否作为尿蛋白所致RTECs 损伤的手段。此外，我们还进一步探讨了尿蛋白对自噬通路的主要环节产生的影响。我们撰写的SCI论文《Autophagy protects renal tubular epithelial cells from protein overload-induced injury》已投稿在国际肾脏病杂志《Kidney International》（2012年影响因子6.606），现正根据编委及评审的意见进行修改。. 在本项目中，为了探讨自噬能否对尿蛋白所致RTECs损伤起保护作用，我们研究了RTECs自噬活性的变化和自噬在体内体外蛋白超负荷所致RTECs损伤中的作用。结果发现，在肾病综合征微小病变肾病患者和蛋白超负荷大鼠的肾小管上皮细胞中，自噬泡是增多的。HK-2细胞在尿蛋白刺激后LC3-II和Beclin 1的表达也增多。尿蛋白可使溶酶体向核周聚集，有报道这可为自噬体与溶酶体的结合提供更多的结合位点。综上所述，自噬流量在蛋白超负荷肾小管上皮细胞中很可能增加。此外，我们发现，雷帕霉素通过增加自噬流量，减少尿蛋白所致的RTECs凋亡和损伤因子NGAL、Kim-1的产生；而氯喹则相反。在蛋白超负荷大鼠模型中，我们也发现了同样的结果。以上结果表明肾小管上皮细胞在尿蛋白刺激后自噬流增多是细胞的适应性反应，提高自噬活性可能为减少尿蛋白所致RTECs损伤提供一个新的策略。