血清microRNA表达在甲状腺肿瘤诊断中的作用及生物学意义

甲状腺肿瘤的术前诊断缺乏有效可靠的指标，研究发现血清microRNA(miRNA)有望成为新兴的肿瘤诊断和预后的分子标志物，但是其与甲状腺肿瘤的相关研究尚未见报道。本研究通过基因芯片技术分析甲状腺癌、良性结节和正常对照者血清中miRNA表达的差异，荧光定量PCR确认在甲状腺癌与良性结节患者及正常对照者血清中有差异表达的miRNA，寻找可能的诊断标志物。检测对应肿瘤组织中miRNA表达谱以明确血清miRNA 的表达谱是否与之存在关联。通过测序检测甲状腺癌组织中BRAF、RAS基因突变和PAX8/PPARγ1、RET/PTC融合基因，研究血清miRNA表达与甲状腺癌体细胞突变之间的相关性。本研究不仅为血清miRNA可以作为甲状腺肿瘤诊断标志物提供直接证据，还将为甲状腺癌发生、发展的理论及寻找治疗靶点提供新的内容。

目前对于甲状腺乳头状癌与良性结节的鉴别缺乏可靠和有效的标志物，既往研究发现血清microRNA(miRNA)可能成为多种肿瘤的诊断和预后的分子标志物。我们的研究通过检测甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)、甲状腺良性结节和正常对照者血清中miRNA表达，寻找可能的诊断标志物。用Solexa测序技术检测106例甲状腺乳头状癌、95例甲状腺良性结节和44例正常对照者血清miRNA表达谱，筛选出差异表达的miRNA，利用qRT-PCR方法进行验证。分析血清和组织中差异表达的miRNA及甲状腺乳头状癌患者术前和术后血清miRNA的表达。我们的研究发现，与甲状腺良性结节组及正常对照组比较，血清let-7e、miR-151-5p和miR-222在PTC中表达明显升高，ROC曲线分析发现这三个miRNA具有较高的特异性和灵敏度；let-7e、miR-151-5p和miR-222表达尚与肿瘤的淋巴结转移、肿瘤大小以及TNM分期等临床病理信息相关；血清miR-151-5p和miR-222在PTC患者术后表达显著下降，可能可以作为预后及复发的预测因子；miR-151-5p和miR-222在组织和血清中表达一致。我们的研究结果提示血清miRNA可能可以作为诊断甲状腺乳头状癌的新的和微创性的分子标记物。. 此外，我们进行PTC的miRNA表达与BRAF基因突变之间潜在的相关性探讨。应用qRT-PCR的方法检测52例PTC石蜡样本及52例良性甲状腺结节石蜡样本中5个miRNA（miR-221、miR-222、 miR-146b、 miR-181和 miR-21)的表达水平，这5个miRNA被报道在PTC中表达明显增高。我们的研究发现相比于甲状腺良性结节，在PTC中的miR-221、 miR-222、miR-146b、miR-181和 miR-21表达水平明显升高。这5个miRNA均可能用于鉴别PTC及甲状腺良性结节，其中 miR-146b具有最大的ROC曲线下面积（AUC=0.952），敏感度和特异度分别为90.4%和88.5%。BRAF基因突变在III、IV期的PTC中发生率更高。miR-221、miR-222、miR-146b和miR-181在BRAF基因突变的PTC中表达水平明显升高。