LncRNA MEG3靶向c-MET调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡及其机制研究

Rheumatoid arthritis (RA) is mainly characterized by tumor-like proliferation and aberrant apoptosis of fibroblast like synoviocytes (FLS).We found that lncRNA MEG3 downregulated in RA FLS with its roles unknown. Studies verified that c-MET is one of the targets of MEG3 and plays a significant role in the abnormal proliferation and apoptosis of various tumor cells, as well as in RA FLS. Based on bioinformatics analysis，we suggested that MEG3 act as the precursor or cooperator of miR-361-5p，modulating the expression of c-MET. This project is to investigate how MEG3 targeting c-MET and how it involves in RA FLS proliferation and apoptosis by the application of real-time PCR, Western blot, RNA transfection, luciferase assay and RNA binding protein immunoprecipitation(RIP)in RA FLS. This study may provide experimental data and theoretical basis for elucidating the role of lncRNA in RA，and also provide new strategies for the treatments of RA.

类风湿关节炎（RA）的主要病理特征是成纤维样滑膜细胞（FLS）的肿瘤样增殖和凋亡障碍。申请者研究发现，lncRNA MEG3在RA FLS低表达，但其意义尚不清楚。研究表明， c-MET是lncRNA MEG3的作用靶点，并与RA FLS及多种肿瘤异常增殖和凋亡相关。申请者生物信息学分析显示，MEG3可能作为miR-361-5p前体分子或与其协同作用，影响靶基因c-MET的表达。本项目拟在此基础上，以RA FLS细胞培养为平台，利用real-time PCR、Western blot、RNA转染、荧光素酶报告基因、RNA结合蛋白免疫沉淀等实验技术，深入探讨lncRNA MEG3靶向c-MET的作用机制，及其对RA FLS增殖及凋亡的影响，为阐明lncRNA在RA中的作用及意义提供实验和理论基础，为RA治疗提供新的靶点。

类风湿关节炎（RA）的主要病理特征是成纤维样滑膜细胞（FLS）的肿瘤样增殖和凋亡障碍。多种lncRNA与 RA-FLS异常增殖和凋亡相关，然而其中发挥关键作用的lncRNA有待进一步明确。由于研究初期发现MEG3对RAFLS增殖凋亡的影响存在争议，我们使用lncRNA芯片技术进一步筛查RA-FLS被白藜芦醇抑制增殖后的关键lncRNA表达差异，用PCR验证差异，我们发现RA-FLS中LINC00222、NEAT1、SNHG5等多种lncRNA表达下调，在白藜芦醇作用后表达上调，可能是RA增殖以及白藜芦醇作用于RA的关键靶点。利用CNC分析、ceRNA分析、GO和pathway分析研究其中lncRNA、miRNA、mRNA互作网络，我们发现LINC00222 可能通过与miR221-5p相互作用，通过ceRNA途径，影响靶基因RXRA的表达，并且在Th17细胞分化通路中起到重要作用。研究构建LINC00222过表达病毒载体，使用TNFa激活的RA FLS模型，对比LINC00222过表达对于RA-FLS以及白藜芦醇干预后的RA-FLS的影响，使用PCR分析其对miR221-5p和RXRA表达的影响。利用荧光素酶报告系统，研究LINC00222、RXRA、miR221-5p之间的相互作用。研究结果发现，LINC00222过表达可以显著抑制RA-FLS的增殖，并且可能在白藜芦醇抑制RA滑膜细胞增殖过程中发挥关键作用，LINC00222过表达可抑制RA-FLS中RXRA的表达，后者可能是LINC00222作用于RA-FLS的靶基因。由于时间经费限制，芯片和生物信息学分析的局限性，后续LncRNA与miRNA、mRNA相互作用的机制研究没有得出阳性结论。但本研究为RA-FLS增殖中，尤其作为是药物作用靶点的关键差异性lncRNA及其作用机制提供了大量依据，找到了关键lncRNA LINC00222，验证了其对RA-FLS 增殖的显著影响，也为进一步深入lncRNA在RA-FLS增殖和凋亡方面的作用机制研究搭建了重要平台。