环状RNA Foxo3靶向Id1在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡中的作用及机制研究

Rheumatoid arthritis (RA) is mainly characterized by tumor-like proliferation and aberrant apoptosis of fibroblast like synoviocytes (FLS). Circular RNA Foxo3 (circ-Foxo3) is closely related to cell proliferation and apoptosis. Id1 is an important target of cir-Foxo3 in regulating cell proliferation and apoptosis. Applicants have found that circ-Foxo3 is low expressed in RA-FLS, while Id1 is highly expressed with its underline roles unknown. This project is to investigate the effect of circ-Foxo3 on RA-FLS proliferation and apoptosis and its mechanism whether circ-Foxo3 could influence the PI3K and MAPK signaling pathways by targeting Id1 in vivo and in vitro by the application of RNA binding protein immunoprecipitation, RNA pull down real-time PCR, Western blot and RNA transfection experiment. This study may provide experimental data and theoretical basis for elucidating the role of circ-RNA in RA, and also provide new strategies for the treatment of RA.

类风湿关节炎（RA）的主要病理特征是成纤维样滑膜细胞（FLS）的肿瘤样增殖和凋亡障碍。目前研究表明环状RNA Foxo3（circ-Foxo3）与细胞增殖和凋亡密切相关。细胞分化抑制因子1（Id1）蛋白是circ-Foxo3抗凋亡作用的重要靶点之一。申请者初步研究发现circ-Foxo3在RA-FLS低表达，而Id1呈高表达，但其在RA中的作用及具体机制尚不清楚。本项目拟利用RNA免疫共沉淀、RNA pull down、real-time PCR、Western blot、RNA转染等实验技术，在体内和体外实验中探讨circ-Foxo3在RA-FLS增殖及凋亡中的作用及其是否通过结合Id1影响PI3K、MAPK等信号通路导致RA-FLS异常增殖和凋亡，为进一步阐明circRNA在RA中的作用提供实验和理论基础，为RA治疗提供新的靶点。

类风湿关节炎（RA）的主要病理特征是成纤维样滑膜细胞（FLS）的肿瘤样增殖和凋亡障碍。目前研究表明环状RNA Foxo3（circ-Foxo3）与细胞增殖和凋亡密切相关。细胞分化抑制因子1（Id1）蛋白是circ-Foxo3抗凋亡作用的重要靶点之一。在本项目中，我们通过高通量测序发现RA和OA (骨关节炎)患者滑膜细胞存在多个差异表达的非编码RNAs(ncRNAs)。其中，与骨关节炎患者相比，circ-Foxo3在RA-FLS中表达明显下降。随后我们采用RT-PCR的方法证实circ-Foxo3在RA-FLS中低表达，而Id1高表达。进一步在体外实验中发现，circ-Foxo3的低表达与TNF-α诱导的RA-FLS增殖、凋亡及Id1的表达有关。利用real-time PCR、Western blot、质粒转染等实验技术，我们发现过表达circ-Foxo3可抑制TNF-α诱导的RA-FLS增殖、促进RA-FLS凋亡并影响Id1的表达；其主要机制可能是circ-Foxo3靶向ID1抑制了PI3K/Akt信号通路，进而影响下游促凋亡因子Bad磷酸化。上述结论提示circ-Foxo3/ID1/PI3K/Akt轴参与类风湿关节炎滑膜细胞过度增殖和异常凋亡，circ-Foxo3可能是类风湿关节炎潜在的治疗靶点。为进一步阐明circRNA在RA中的作用提供实验和理论基础，为RA治疗提供新的靶点。