基于血清指纹图谱技术研究一种新的中药含药血清的制备方法

For recent 20 years, there are no indicators and standard operation procedures for preparing serum containing drug. As a result, the credibility and reproductively of pharmacology experiment results in vitro have been reduced. For the complexity of TCM, the digestion rates, absorptions rates and metabolism rates are different between the ingredients in TCM. Our previous studies have shown that the serum ingredients gotten in different times are also different. We believe that the TCM pharmacological effects are a combined action of different ingredients with different absorption rates. An ideal serum containing drug should contain all the absorbed constituents by the body. So developing a new method for preparing serum containing different absorption rates ingredients can resolve the problem. In this study, we will take Guizhi decoction for example. The serum fingerprint technology will be used to analyze the absorption characteristics of the ingredient in Guizhi decoction. We will divide these ingredients into several groups according to their absorption rates. The best time for take each groups of ingredients will be chosen separately. Then we will mix these serums taking in above times to get a new serum containing drug. In the last we will compare the ingredients and pharmacological effects between the new serum containing drug and traditional one. We hope we can provide a new serum containing drugs which can reflect the total pharmacological effect of TCM.

近20年来中药含药血清的制备方法存在许多争议，主要在于无可参考的量化指标和规范的操作，影响了中药体外药理试验的可信度。中药成分复杂，各成分在体内消化、吸收、代谢速率差异较大。我们前期研究证明，不同时点获取的血清中的药物成分组成和含量均存在很大差别。我们认为：中药的药效，应是药物中以不同速率吸收进入体内的各种效应成分的综合作用。理想的中药含药血清中的药物成分组成和含量应尽可能与其可被吸收的全部成分相一致。因此，制备含有不同吸收速率成分的含药血清可能是解决这一关键科学问题的最佳途径。本研究拟以桂枝汤为例，利用UPLC-MS指纹图谱技术研究桂枝汤中各成分在体内的吸收过程，将这些成分按照吸收快慢分为若干类，分别确定各自的最适采血时间，将这些时间采集的血清混合即可制备新的含药血清，并与传统方法制备的血清进行比较。本研究可为中药血清药理学研究提供一种更能真实反映中药整体效应特点的、新的含药血清制备方法

近20年来中药含药血清的制备方法存在许多争议，影响了中药体外药理试验的可信度。本研究认为：中药的药效，应是药物中以不同速率吸收进入体内的各种效应成分的综合作用。理想的中药含药血清中的药物成分组成和含量应尽可能与其可被吸收的全部成分相一致。本研究提出全成分血清药的概念，以桂枝汤为例，探讨一种新的含药血清制备方法。.本研究首先规范了汤剂的制备方法，建立了桂枝汤汤剂中芍药苷、甘草苷、甘草酸、肉桂酸4个成分，以及总多糖含量测定方法。利用HPLC-Q-TOF，确定了桂枝汤中71个成分，大鼠血清、尿液中15个原型成分以及52个代谢成分的化学结构。.本研究利用HPLC-QQQ检测桂枝汤中芍药内酯、芍药苷、甘草苷、甘草素、甘草酸、姜酚、肉桂酸、甘草次酸等8种成分在体内的药代动力学特征。以上8种化合物涉及桂枝汤中4种药材，可以较全面的反映桂枝汤汤剂吸收入血成分的特征。研究发现，桂枝汤中脂溶性低的成分肉桂酸、姜酚在体内入血较快，基本30min可以达到血药浓度高峰，芍药苷、甘草苷等苷类成分需1小时左右，而甘草次酸这类需要代谢后被吸收的成分，则需要在8小时。所以本研究确定将30min、1h和8h的含药血清合并后作为桂枝汤的全成分血清。.本研究利用IL-1β刺激的bEnd.3细胞，比较了全成分血清和传统含药血清之间药效的强弱。发现桂枝汤汤剂20%、10%传统含药血清和全成分血清，均产生保护作用，细胞外液中PGE2的水平均明显低于模型组（P＜0.05），但全成分含药血清的药效明显强于传统方法制备的含药血清（P＜0.05）。含量测定结果显示，全成分含药血清中药物主要成分的含量均高于传统含药血清。.综合以上结果可见，桂枝汤汤剂全成分血清较传统含药血清包含更多的汤剂吸收入血成分，药效也强于传统含药血清。研究结果证明了前期提出的假说：理想的中药含药血清中的药物成分组成和含量应尽可能与其可被吸收的全部成分相一致。通过本研究为中药体外药效学实验提供了一种新的、更符合中药实际作用特点的含药血清的制备方法。