肺结核证候分型血清蛋白质指纹图谱研究

耐药肺结核病的高发是我国肺结核病防治最突出的难点。中西医结合治疗耐药肺结核具有一定优势，但中医仍存在证侯分型不统一，辨证未量化的瓶颈，严重限制肺结核病中西医结合疗效的提高和临床推广应用。基于前期研究的基础，本课题应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-MS），研究肺结核中医治疗方案中最具代表性的证候四型分法，绘制肺结核不同证候的差异性血清蛋白质指纹图谱。筛选出能反映肺结核证候分型的标志蛋白质峰，建立肺结核证候分型血清蛋白质指纹图谱诊断模型。经临床双盲试验，研究该诊断模型的特异性与敏感性，评估其作为传统中医辨证"四诊"之外的，新的辅助性证候分型分子诊断方法的可行性，指导临床辨证，提高中西医结合防治肺结核疗效。本课题首次应用MALDI-TOF-MS技术，建立肺结核证候分型的血清蛋白质指纹图谱模型，为阐明中医证候的生物学本质，奠定了理论基础和科学依据。

目前用于肺结核病治疗的西药虽然有效但毒副作用大，且易形成耐药性。而中西医结合治疗肺结核具有一定优势，但中医证侯分型不统一，辨证未量化，严重限制了中西医结合治疗肺结核病的临床推广应用。本课题研究肺结核中医治疗方案中最具代表性的证候三型分法，绘制肺结核不同证候的差异性血清蛋白质指纹图谱，并筛选能反映肺结核证候分型的标志蛋白质峰。肺阴虚证与阴虚火旺和气阴两虚证比较均存在差异的蛋白峰有12个(P<0.001)，阴虚火旺证与肺阴虚和气阴两虚证比较均存在差异的蛋白峰有12个(P<0.001)，气阴两虚证与肺阴虚证和阴虚火旺证比较均存在差异的蛋白峰有34个(P<0.001)；有7个蛋白峰在三证间的含量呈肺阴虚→阴虚火旺→气阴两虚逐渐降低变化。研究应用BPS软件建立肺结核证候分型血清蛋白质指纹图谱诊断模型，以三证候间两两有差异的74个差异峰(P<0.001)为基础构建了由3961.7、4679.7、5646.4、8891.2、9416.7 m/z 5个蛋白标志峰组成的肺结核中医证候蛋白质指纹图谱辨证模型，对于肺阴虚证、阴虚火旺证和气阴两虚证辨证的准确率分别为为74.0%、72.5%和96.7%。并经临床双盲试验，该模型对于肺结核三证候的分型具有较好的鉴别能力，对于肺阴虚证辨证的准确率为76.2%，对于阴虚火旺证的准确率为70.8%，对于气阴两虚证的准确率为80.0%。对筛选到的蛋白差异峰进行了鉴定和抗体芯片的验证，结果表明9416.7 m/z蛋白峰是apolipoprotein C-III 载脂蛋白C-III中的一段多肽。本课题首次应用SELDI-TOF-MS、MALDI-TOF-MS技术，建立肺结核证候分型的血清蛋白质指纹图谱模型，为阐明中医证候的生物学本质，奠定了理论基础和科学依据。