骨髓间充质干细胞转分化为汗腺细胞后的泌汗功能及机制研究

严重烧（创）伤可导致汗腺解剖结构遭到破坏，使患者丧失排汗散热功能，给患者带来了沉重的生理与心理障碍，严重影响患者身心健康与生活质量。因此，开展重建汗腺的研究不仅具有重要的理论意义，而且具有重要的临床应用价值。我们的前期研究证实：骨髓间充质干细胞（MSCs）可以分化为汗腺细胞并掺入到损伤的汗腺组织，且损伤修复的汗腺具有一定的泌汗功能。但MSCs移植后是否能修复所有损伤的汗腺？这些修复的汗腺是否都有泌汗功能？这些由MSCs转分化的汗腺细胞与正常汗腺细胞的泌汗功能是否相同？泌汗机制是什么？都是需要解决的问题。本课题就是在我们前期研究的基础上，应用免疫细胞/组织化学、Western blot 、电解质分析、酶学测定等手段和方法对MSCs分化为汗腺细胞后的泌汗功能及分化细胞分泌汗液的生物学机制进行深入和详尽的探讨，其结果将对提高创面修复质量起促进作用。

大面积严重烧创伤致汗腺结构破坏，汗腺丧失排汗散热功能，给患者带来了沉重的生理与心理障碍，严重影响患者身心健康与生活质量。因此，开展重建汗腺的研究不仅具有重要的理论意义，而且具有重要的临床应用价值。本课题的研究表明，在一定的体内外条件下，MSCs可以分化为汗腺细胞表型（表达广谱角蛋白、角蛋白7、P-CK 19），表达汗腺的功能蛋白（Na+-K+-ATP酶α/β、Na+-K+-2Cl共转运体1、水通道蛋白5、Na+/H+交换子1、囊性纤维化跨膜传导调节因子）和细胞连接蛋白（E-钙粘蛋白，紧密连接蛋白ZO-1/2，紧密连接蛋白claudin-1，桥粒芯糖蛋白1/2）；热休克汗腺与MSCs间接共培养，共培养1周后MSCs表达汗腺细胞标志和汗腺功能蛋白率为1-5%；BrdU标记的MSCs和汗腺细胞在matrigel中3D共培养2周，MSCs参与汗腺3D结构形成、转分化为汗腺细胞表型、并且表达汗腺功能蛋白/细胞连接蛋白的几率为1-2%；体内，MSCs转分化为汗腺细胞的几率约0.5-1‰，移植的MSCs参与了损伤汗腺组织的修复，碘-淀粉实验显示MSCs组（大鼠足垫创伤+MSCs局部注射）汗腺功能的恢复略优于生理盐水组（大鼠足垫创伤+生理盐水局部注射），但明显低于正常组。对大鼠足垫皮肤标记滞留细胞（干细胞）的研究发现：6周时，汗腺组织BrdU+标记率为(4.2±1.3%)，明显高于表皮基底层细胞BrdU+标记率(0.5±0.1‰) (P<0.05)。从本课题的研究，我们得出：体内外条件下，MSCs参与汗腺3D结构的形成和汗腺的损伤修复，表达与汗腺泌汗功能密切相关的功能蛋白和细胞连接蛋白，促进在体损伤汗腺泌汗功能的恢复。MSCs的体内转分化率很低，但MSCs组损伤汗腺功能的恢复优于生理盐水组；且大鼠汗腺具有丰富的干细胞，我们推测可能MSCs的转分化作用和旁分泌效应（促进内源干细胞激活）共同促进汗腺功能的恢复。