基于抗原组学技术筛选和鉴定尖吻蝮蛇毒的有效保护性抗原

应用超免抗全蛇毒血清仍是目前毒蛇咬伤后紧急救治的主要手段，但效价低、来源困难且毒副反应常见。寻找有效保护性抗原，通过基因工程技术制备特异性中和抗体是蛇毒免疫治疗的发展方向。最近基于生物信息学所做的蛇毒多表位抗原免疫研究及针对蛇毒亚单位抗原的免疫研究均效果欠佳。本研究拟在前期成功构建尖吻蝮蛇毒特异性抗体库的基础上，应用新近发展的抗原组学技术,进行尖吻蝮蛇毒有效保护性抗原的筛选和鉴定。首先提取和分割尖吻蝮蛇毒基因组，建立尖吻蝮蛇毒全基因组展示肽库，应用免疫磁珠分选技术和生物信息学比对分析技术，筛选抗原肽，形成"抗原组"， 而后采用基因工程技术，重组并纯化候选保护性抗原，获得重组"抗原组"蛋白。进一步通过动物实验，评价其免疫后抗体效价及其被动免疫保护效应。本课题的成功实施，将为寻求更完善合理的蛇毒抗体制备途径奠定基础，对提高毒蛇咬伤救治成功率和减少毒副作用具有重要的理论意义和临床价值。

抗蛇毒血清仍是目前毒蛇咬伤后紧急救治的主要手段，但效价低、毒副反应常见是目前存在的主要问题。寻找有效保护性抗原，通过基因工程技术制备特异性中和抗体是蛇毒免疫治疗的发展方向。本研究应用新近发展的抗原组学技术,进行尖吻蝮蛇蛇毒有效保护性抗原的筛选和鉴定。首先利用免疫亲和层析技术构建特异性尖吻蝮蛇蛇毒多克隆抗体库，然后利用特异性多克隆抗体库对随机12肽库进行生物淘选，获得30个阳性克隆菌株，18个阳性克隆送交测序，获得其对应的抗原序列，利用免疫亲和实验对阳性克隆菌株进行进一步筛选，并利用生物信息学技术进行比对分析，共获得5个有模拟表位，而后采用基因工程技术，对6个模拟表位进行重组表达、纯化，获得重组“抗原组”蛋白。将重组“抗原组”蛋白免疫BALB/c小鼠，获得抗体血清，该抗体血清能有效的识别重组抗原和尖吻 蝮蛇蛇毒，能有效的中和蛇毒所致的出血效应。本课题的成功实施，将为寻求更完善合理的蛇毒抗体制备途径奠定基础，对提高毒蛇咬伤救治成功率和减少毒副作用具有重要的理论意义和临床价值。