Galectin-9调控Th17分化和功能在移植排斥中的作用机制

Thl7是新发现的一类CD4+ T细胞亚群，在自身免疫性疾病等炎症反应中发挥重要作用，但在移植排斥发生发展中的作用尚不明了。在临床研究中我们观察到：肝移植后血清IL-17表达升高常伴随排斥反应的发生。为了探讨Th17在移植排斥中的作用及其调控的分子机制，在分离和培养移植受体中的Th17的基础上，通过分析其表型包括Galectin-9的表达和生物学特征与移植排斥产生的关系；构建人源性Galectin-9蛋白，研究Galectin-9对Th17活化、表型和功能的影响；以Rag-2-/-小鼠为受者观察Galectin-9作用后的Th17回输后，对all-DTH的影响；以自然耐受或排斥品系间心脏移植为模型，观察Galectin-9对排斥的发生率及生存期的影响，并探讨Galectin-9对Th17分化调节与免疫抑制剂的敏感性的关系，为进一步认识Th17在在肝移植排斥中的调控作用提供实验数据。

本课题以临床工作中发现的器官移植手术后，患者血清IL-17异常上高伴随移植排斥反应的发生为出发点，探讨了与IL-17水平直接相关的Th17细胞在心脏移植排斥反应的发生发展过程中的作用及作用的分子机制。由于在既往的研究报道发现半乳凝素-9（Galectin-9）具有调控DC细胞成熟进而调节免疫的能力，而我们的临床工作也观测到肝脏移植患者术后血清中Galectin-9水平明显降低的现象。因此我们重点研究了Gal-9对Th17细胞的调控作用以及与移植排斥反应间的关系。. 我们克隆了人Gal-9基因，并在大肠杆菌中对Gal-9融合蛋白的表达、分离和纯化，并得到人Gal-9蛋白。在同种心脏移植后，采用流式细胞术从移植受体小鼠的脾脏中分离出Th17细胞进行体外培养。体外实验发现，在发生急性排斥反应的心脏移植受体小鼠中，其血清中的IL-17水平显著升高，这与临床观测的器官移植病人的表现相一致，CD4+ IL-17+T细胞数量与急性排斥反应的发生呈正相关。这一结果提示上调的CD4+ IL-17+T细胞很可能是心脏移植中急性排斥反应的一种新的生物标记。Gal-9可以抑制Th17细胞的增殖分化和IL-17及IL-23R的表达。体外研究发现，Gal-9能有效阻止IL-17的升高进而起到保护Th17细胞的功效。结果表明Gal-9在降低心脏移植手术中的急性排斥反应中起到了潜在的调控作用，我们的研究为这一结论提供了一定的实验依据。